[发明专利]一种新的多肽——二氢乳清酸酶10和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——二氢乳清酸酶10，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

嘧啶核苷酸的生物合成对于在所有存活的细胞中生成遗传物质(DNA与RNA)是极为重要的。在哺乳动物细胞中，嘧啶核苷酸(UTP与CTP)可通过一个从头途径由简单的前体合成，或通过补救途径由存在于血液中的先成核苷酸(尿嘧啶核苷与胞嘧啶核苷)合成(Souciet J.-L.，Nagy M.，Le Gouar M.，Lacroute F.，Potier S.，Gene79：59-70(1989))。

二氢乳清酸酶(氨甲酰天东氨酸脱水酶)(DHOase)催化嘧啶从新生物合成的第三步，转化脲基琥珀酸(N-氨甲酰基-L-天冬氨酸)为二氢乳清酸。二氢乳清酸酶与一个催化活性所需的锌离子结合(Brown D.C.，Collins K.D.，J.Biol.Chem.266：1597-1604(1991))。在较高等真核生物中，DHOase是一个已知的大的多功能蛋白的组分，在哺乳动物中这个多功能蛋白是CAD，它催化嘧啶生物合成开始的三个步骤。DHOsae域位于这一多蛋白的中心部分，亦有发现一个缺损的DHOase域存在于一个催化嘧啶生物合成头两步的多功能蛋白(由基因URA2编码)中。不同来源的DHOase序列中具有两个高度保守的区域，第一个位于N-末端，其中含有两个参与结合锌离子的组氨酸残基：D-[LIVMFYWSAP]-H-[LIVA]-H-[LIVF]-[RN]-x-[PGANF]。第二个位于C-端部分：[GA]-[ST]-D-x-A-P-H-x(4)-K。在催化反应中，氨甲酰天冬氨酸通过一个碱基转换状态被转化，二氢嘧啶环6位上的两个氧原子与结合在酶表面的锌原子强烈作用，然后转换状态结束并产生二氢乳清酸(Davidson J.N.，Chen K.C.，JamisonR.S.，Musmanno L.A.，Kern C.B.，BioEssays15：157-164(1993))。

本发明新的的多肽具有二氢乳酸酶家族所特有的结构及功能，并含有上述两个特征序列模板，属于二氢乳酸酶家族，该多肽及其激动剂，抑制剂，拮抗剂可用作为抗疟疾与抗癌药物(United States Patent4,873,228，Schmalzi，et al.0ctober10，1989)。

由于如上所述二氢乳清酸酶10蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的二氢乳清酸酶10蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新二氢乳清酸酶10蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——二氢乳清酸酶10以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码二氢乳清酸酶10的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码二氢乳清酸酶10的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产二氢乳清酸酶10的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——二氢乳清酸酶10的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——二氢乳清酸酶10的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与二氢乳清酸酶10异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO：1中37-306位的序列；和(b)具有SEQ ID NO：1中1-1270位的序列。