[发明专利]一种新的多肽——人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

受体结构和功能的研究重点在于在正常状态和疾病状态下的胆固醇内环境稳定性以及细胞内吞作用的细胞生物学[Brown，M.S.and Goldstein.J.L.1986.Science，232，34-47]。LDL受体不可能是阿扑脂蛋白E(apoE)的唯一受体，因为乳糜微粒残余、HDLc和β-VLDL微粒水平并在动物或缺乏LDL受体病人体内并没有升高。而且，在过表达LDL-受体的转基因鼠中，LDL聚集现象减少[Hoffman，S.L.，Rus sell，D.W.，et al.，19 88.Science，239，1277-1281]。在肝脏这个脂蛋白代谢的中心器官中，发现有低摩尔量的wt阿扑脂蛋白E结合蛋白，但是这些结合蛋白并不是真正的阿扑脂蛋白E受体，阿扑脂蛋白E受体是那些高摩尔量的wt脂蛋白受体[Hoeg，J.M.，Demosky，S.J.，Lackner，K.J.，etal..1986.Biochem.Biophys.Acta，876，13-21]。不同的阿扑脂蛋白E受体可能同时与损伤性神经组织的再生功能、免疫反应的调节以及细胞生长和分化的调节有关[Mahley，R.W.1988.Science.240，622-630]。直到现在，还没有受体被纯化或克隆出来。但是，已经克隆出了一个与LDL-受体以及表皮生长因子前体同源性非常高的细胞表面蛋白，取名为LDL-受体相关蛋白(LRP)。

LDL-受体相关蛋白都是由LDL-受体和EGF-前体的序列结构域组成。该分子可能包括以下功能区域：(1)与LDL-受体相似的由四个拷贝组成的分子外结构域；(2)一个与EGF相似的生长因子重复区域；(3)一个转膜片段；(4)一个细胞质尾巴，可能包含引导积聚物质进入内吞小窝的两拷贝的信号肽。

在LDL-受体相关蛋白的分子外结构域中，有四个A类半胱氨酸富含结构域簇，这些结构域簇类似于LDL-受体中负责与阿扑脂蛋白B和阿扑脂蛋白E结合的结构域[Yamamo to，T.，Davis，CG.，Brown，M.S.，Schneider，WJ.，etal.，1984.Cell.39，27-38]。这些结构域总共带有158个负电荷，其共有序列比末端的补足成分更象LDL-受体。这表明该分子是一个能与脂蛋白微粒中带正电荷的配基(例如阿扑脂蛋白B或阿扑脂蛋白E)结合的表面受体蛋白。

LDL-受体与高胆甾醇血病直接相关。LDL-受体的研究对细胞内吞作用的了解意义非凡，并将使基因治疗成为可能。LDL-受体相关蛋白因为与LDL-受体蛋白的结构和生化特征密切相关，所以它可能是另一种脂蛋白受体家族的成员，该脂蛋白受体与不同的包括阿扑脂蛋白E和阿扑脂蛋白B的配基有特异性结合。研究表明，LDL-受体相关蛋白与动脉硬化症密切相关。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1 024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人低密度脂蛋白受体相关蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69。

由于如上所述人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人低密度脂蛋白受体相关蛋白8.69的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。