[发明专利]一种新的多肽——人网蛋白10和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人网蛋白10，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

KIAA0454是依据按大小进行分级分离而从人脑cDNA中测得的编码序列，它在体外编码大蛋白质分子(大于100KD)。其开放读框序列编码1882个氨基酸，框内C端密码子的上游具有ATG密码子，并且ATG密码子符合Kozak’s规则，与Kozak’s序列相匹配，这有利于开放读框序列的起始翻译。(Naohiko etal.,1997；Kozak Met al.,1996).KIAA0454蛋白被认为是一种网蛋白(Ken-ichiI,et al.,1996)

网蛋白(plectin)是已知最大的多肽家族之一，其组织分布广泛，它最先被鉴定为培养细胞中间丝制剂的主要组分。它是一种中间丝结合蛋白，可作为细胞骨架的跨连结组分给细胞和组织提供机械支持。Liu等人从胎盘首获人网蛋白基因(PLEC1)。(Pytela and Wiche,1980；Liu et al.,1996)。

PLEC1编码序列包含32个外显子，它跨越了32kb。多数内含子处于一个编码序列之内，此序列编码N端的球型结构域，而整个的中心棒状结构域和整个的C端球型结构域分别由超过3kb与6kb的简单外显子编码。网蛋白具有三联的结构模式，其中长的核心棒状结构域具一个α螺旋卷曲结构，它由C端与N端的球形结构域进行侧面连接；网蛋白有许多重复的区域，核心棒状结构域有五个亚区域约含200个氨基酸残基，其中可变氨基酸具有高重复，并涉及网蛋白之间、网蛋白与波形蛋白，网蛋白与核纤层蛋白的相互作用；C端的球形结构域有一显著的六折串联重复，每一重复有高度保守的中心区域。(Wiche et al.,1991；Wiche G,et al.,1991；Liu et al.,1996)。

人PLEC1基因结构与人类天疱疮样大疱免疫抗原1基因极为相似。(Wiche etal.,1991)。

研究发现，肌肉营养不良伴单一表皮水疱症(MDEBS)是由于网蛋白不足，并把MDEBS原因定位于染色体8q24.13-qter。在MDEBS患者家族中，发现了plectincDNA上的纯合子移码突变，此大分子的多功能的细胞骨架蛋白plectin的缺乏会导致肌肉与皮肤的结构失常。(Gache et al.,1996；Smith et al.,1996)

在表皮水疱症伴营养不良综合症(EB-MD)的两不同家族患者中进行网蛋白的超显微结构与分子研究发现，一个家族的plectin cDNA上的纯合子9-bp的缺失突变，另一个家族的plectin cDNA上的单核苷酸缺失并导致移码与下游16bp未成熟密码子的突变，Pulkkinen等人认为网蛋白对于中间丝与细胞基底膜的半桥粒复合物的网络连接是至关重要的，网蛋白也可能作为附着蛋白，对于膜复合物来说调节着与肌动蛋白的结合。(Pulkkinen et al.,1996；McLean et al.,1996)。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与人网蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人网蛋白10。

由于如上所述人网蛋白10蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人网蛋白10蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人网蛋白10蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人网蛋白10以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人网蛋白10的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人网蛋白10的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人网蛋白10的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人网蛋白10的抗体。