[发明专利]一种新的多肽——分子伴侣cpn60蛋白15和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--分子伴侣cpn60蛋白15，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

近年来，人们对“分子伴侣”的研究比较活跃。伴侣蛋白在生物体内参与蛋白折叠及寡聚蛋白复合物聚集、维持蛋白质前体处于解折叠状态以便于蛋白跨膜运输及使变性蛋白得以解聚和修复等多种重要的生物学过程。其主要是辅助其他多肽维持正常的构象，以形成正确的寡聚结构，从而发挥正常的生理学功能。它们分布非常广泛，从细菌到人，动物和植物，在原核生物、叶绿体及线粒体中均大量存在。该类蛋白在生物体内的表达异常将导致一些蛋白正常构象的形成，从而影响各种蛋白发挥正常的生理学功能及引发各种与物质转运异常相关的疾病，如一些代谢紊乱症、免疫紊乱症等。

分子伴侣形成一寡聚复合物，其由两个不同的亚单位组成：一个为60Kd的蛋白，如cpn60(在细菌中为groEL)；另一个为13Kd蛋白，如cpn10(在细菌中为groES)。它们均在生物体内与一些蛋白相互作用，以调节各种蛋白在生物体内的功能。

cpn60蛋白具有弱ATP酶活性，所有的伴侣蛋白的该亚单位均由高度保守的550-580个氨基酸残基组成。cpn60蛋白均含有一由12个氨基酸残基组成的保守的一致性序列片段，该片段如下所示：

A-[AS]-X-[DEQ]-E-X(4)-G-G-[GA]；

该序列片段是该亚单位与其他蛋白相互作用，协调分子伴侣发挥正常生理学功能重要部位。该片段同时是该亚单位发挥ATP酶活性的重要部位。该序列片段的突变将导致亚单位的功能异常，从而影响整个分子伴侣在生物体内的功能。该蛋白在生物体内还可结合其他相关蛋白发挥各种相似的蛋白调节作用。因而，其与生物体内一些物质转运相关的疾病，如各种代谢紊乱症、免疫系统紊乱症等的发生密切相关。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与分子伴侣cpn60蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为分子伴侣cpn60蛋白15。

由于如上所述分子伴侣cpn60蛋白15蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的分子伴侣cpn60蛋白15蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新分子伴侣cpn60蛋白15蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--分子伴侣cpn60蛋白15以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码分子伴侣cpn60蛋白15的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码分子伴侣cpn60蛋白15的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产分子伴侣cpn60蛋白15的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--分子伴侣cpn60蛋白15的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--分子伴侣cpn60蛋白15的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与分子伴侣cpn60蛋白15异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。