[发明专利]一种新的多肽——人分支alpha－酮酸脱氢酶E1－beta亚单位9和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人分支alpha-酮酸脱氢酶E1-beta亚单位9，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

分支α-酮酸脱氢酶是一种多酶复合物，在生物体内催化调控分支酮酸氧化反应的进行，通过分支氨基酸的转氢反应形成分支α-酮酸的氧化产物。在绿脓杆菌及多种高等生物体内均存在分支α-酮酸脱氢酶，该酶由绿脓杆菌等生物体内的分支氨基酸或分支酮酸刺激表达。在绿脓杆菌中，分支α-酮酸脱氢酶由三个功能性组成成分共同组成：E1、E2及E3。

研究发现，分支α-酮酸脱氢酶的组成成分E1又由两个非典型的亚单位E1.α及E1.β组成，该组成成分在生物体内催化分支酮酸底物的氧化脱羧反应的进行。脱氢酶的另一组成成分E2则在E1的诱导下与硫辛酸及酰基结合。而组成成分E3是一特异的硫辛酸胺脱氢酶，在缬氨酸或其他分支氨基酸的诱导发挥其作用活性。由此可知，该酶的三种组成成分在生物体内协同作用，以调控体内分支酮酸氧化反应的进行。

人们已从绿脓杆菌、哺乳动物等多种生物体内克隆得到了不同来源的分支α-酮酸脱氢酶，并对其结构及功能进行了深入地研究。1990年，Nobukuni等人又从人中克隆得到了一新的分支α-酮酸脱氢酶E1-β亚单位，比较分析结果表明，该亚单位与牛中克隆得到的E1-β亚单位有较高的同源性。研究发现，哺乳动物α-酮酸脱氢酶复合物在结构与功能上均高度保守，其中组成该复合物组成成分E1的E1.β亚单位在生物体内参与调控多种分支酮酸底物的氧化脱羧反应的正常进行。该蛋白亚单位的突变或表达异常将直接E2及E3组成成分的作用异常，即导致相关的物质代谢途径的异常。研究发现，该亚单位的缺失将导致体内槭糖尿病等疾病的发生。由此可知，该蛋白亚单位在生物体的酮酸氧化过程中起着重要的作用，其表达异常通常与生物体槭糖尿病等糖类代谢紊乱性疾病的发生密切相关[Nobukuni Y.,Mitubuchi H.et.al.,1990,J Clin Invest,86:242-247]。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株、砷刺激6小时的L02细胞株前列腺、心、肺癌、胎膀胱、胎小肠、胎大肠、胎胸腺、胎肌、胎肝、胎肾、胎脾、胎脑、胎肺以及胎心中，本发明的多肽的表达谱与人分支alpha-酮酸脱氢酶E1-beta亚单位的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人分支alpha-酮酸脱氢酶E1-beta亚单位9。

由于如上所述人分支alpha-酮酸脱氢酶E1-beta亚单位9蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人分支alpha-酮酸脱氢酶E1-beta亚单位9蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人分支alpha-酮酸脱氢酶E1-beta亚单位9蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人分支alpha-酮酸脱氢酶E1-beta亚单位9以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人分支alpha-酮酸脱氢酶E1-beta亚单位9的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人分支alpha-酮酸脱氢酶E1-beta亚单位9的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人分支alpha-酮酸脱氢酶E1-beta亚单位9的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人分支alpha-酮酸脱氢酶E1-beta亚单位9的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人分支alpha-酮酸脱氢酶E1-beta亚单位9的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人分支alpha-酮酸脱氢酶E1-beta亚单位9异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。