[发明专利]一种新的多肽——人磷脂酶13和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--人磷脂酶13，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

多细胞有机体的进化依赖于细胞之间的相互通讯联系。由于细胞间存在着精细的分工，一些细胞群体有赖于其他细胞群体，并要求其他的细胞群体对其产生应答反应。这种精巧的细胞间通讯网络可以控制细胞的生长、分裂、死亡、分化形成组织以及各种其他的生命过程。从高等动物间通讯的重要性和复杂性来看，很可能有机体中相当的一部分基因参与了这个过程。

许多细胞信号传递系统需要将磷脂分子水解以产生活化的分子参与信号传递。其中的一类是磷脂酸(pho sphatidic acid,PA),PA可以激活生长因子信号转导，包括蛋白酪氨酸磷酸酶、磷酸酶C,Ras-GTP酶激活蛋白，Raf-1转移，和鞘氨醇激酶。另外，PA可以与肌动蛋白相结合，可以诱导肌动蛋白的聚合。【J Biol Chem,Vol.274,Issue 39,27385-27391,September 24,1999】PA还可以激活嗜中性粒细胞呼吸爆发氧化酶(neut rophil respi ratory burstoxidase)等。

PA由磷脂酶D(PLD,phospholipase D)水解卵磷脂而来。PLD有几种，随它们的在亚细胞水平上的分布、最适pH值、对二价阳离子的依赖程度、被脂肪酸(如油酸盐)和去污剂抑制的程度、以及被小G蛋白如ARFs和RhoA/B,Rac和Cdc42所激活的程度，可以分为若干类。RhoA/B、Rac和Cdc42在调节细胞骨架和有丝分裂激活的蛋白激酶级联的信号传导通路中起中介作用，将PLD激活。【J Biol Chem 1995 Dec 15；270(50)】

PLD在许多种类的细胞和组织中都有发现，提示其在广泛的生理过程，包括代谢调控，炎症，分泌，有丝分裂发生，癌症发生，神经和心血管刺激，糖尿病和衰老等方面中的作用。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株以及前列腺组织中，本发明的多肽的表达谱与人PLD蛋白的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人磷脂酶13。

由于如上所述人磷脂酶13蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人磷脂酶13蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人磷脂酶13蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--人磷脂酶13以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人磷脂酶13的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人磷脂酶13的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人磷脂酶13的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--人磷脂酶13的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--人磷脂酶13的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人磷脂酶13异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中152-511位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-652位的序列。

本发明另外涉及一种含有本发明多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本发明多肽的方法。