[发明专利]一种新的多肽——人磷脂酰肌醇3(PtdIns3)－激酶35和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人磷脂酰肌醇3(PtdIns3)-激酶35，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

磷酸肌醇3-激酶(PI3-激酶)家族的成员参与介导细胞生理活动的各种途径，在哺乳动物中参与受体信号转导，包括生长因子，凝血酶，趋化肽以及细胞因子，受体激活后刺激PI3-激酶活性，使得D-3磷酸化脂质磷脂酰肌醇(PtdIns)(3,4,5)P₃的胞内水平增长。PI3-激酶与具有内在或相关的酪氨酸激酶活性的受体相连，含有p85结合体以及p110的催化亚基，二者可以生成作为二级信使的磷脂酰肌醇(PtdIns),PtdIns4P以及PtdIns(4,5)P₂的3-磷酸化形式。该家族成员包括异源二聚体PI3-激酶，p110α及β它们由酪氨酸激酶，PI3-激酶γ，-种G蛋白激活的PI3-激酶经由p85调节亚基补充并激活。在底物特异性的基础上，该家族被分为两大类。PI3-激酶p110α与β及PI3-激酶γ以磷酸化的磷脂酰肌醇(PtdIns),PtdIns4P以及PtdIns(4,5)P₂作为底物，而磷脂酰肌醇(PtdIns)3-激酶则只能以磷脂酰肌醇(PtdIns)作为底物，因而被归为PtdIns3-激酶(Stephens et al.,1994b；Stack and Emr,1995)。该家族中有一段保守的正离子序列：KRER，紧接在保守的DFG模板之后，处于催化域之中。KRER在PtdIns3-激酶中不存在，因为这段小肽形成底物结合环，可以和PtdIns(4,5)P₂的肌醇环上两个附加的磷酸基团作用，因而是以PtdIns(4,5)P₂为底物的p85-p110PI3-激酶及PI3-激酶γ所特有的。

PtdIns3-激酶参与细胞信号级联，以控制细胞周期进程及胞内蛋白分拣等生理活动，介导生长因子与癌基因产物有关的细胞促有丝分裂及细胞运动，它具有四个保守的区域：区域Ⅰ连接p85结合体，参与和调节亚基或相关蛋白的反应。区域Ⅱ结合磷酸肌醇底物，区域Ⅳ是激酶域，该区域是PI3-激酶家族所有成员的核心区域，具有高度的序列同源性，是蛋白激酶的催化区域，倘若其保守的残基发生突变则会导致PtdIns3-激酶失活。PtdIns3-激酶在体内与p150蛋白一起以细胞复合体形式存在，后者是一种膜相关的丝氨酸/酪氨酸激酶。这种PtdIns3-激酶与p150蛋白复合体与类似甘露糖六磷酸的受体作用，成为大的分拣体系的一部分，能够调节蛋白自高尔基体运至溶酶体。PtdIns3-激酶活性的产物是PtdIns3P，这是一种管家蛋白，它对细胞内蛋白运输进行活性调节(Stefano Volinia et al.,The EMBO Journal 14(14):3339(1995))。PtdIns3-激酶在不同的细胞信号进程中起到重要作用，可以用作为治疗由于信号级联异常引起的疾病。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株以及前列腺组织中，本发明的多肽的表达谱与人磷脂酰肌醇3(PtdIns3)-激酶的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人磷脂酰肌醇3(PtdIns3)-激酶35。

由于如上所述人磷脂酰肌醇3(PtdIns3)-激酶35蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人磷脂酰肌醇3(PtdIns3)-激酶35蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人磷脂酰肌醇3(PtdIns3)-激酶35蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人磷脂酰肌醇3(PtdIns3)-激酶35以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另-个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人磷脂酰肌醇3(PtdIns3)-激酶35的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人磷脂酰肌醇3(PtdIns3)-激酶35的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。