[发明专利]一种新的多肽——硫酸乙酰肝素3－0－磺基转移酶19和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽--硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶19，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

内在性血液凝固丝氨酸蛋白酶被抗凝血酶(AT)逐渐抑制活性[Rosenberg,R.D.(1978)Annu.Rev.Med.29,367-368]。对于产生1∶1的AT复合酶来说，抑制丝氨酸蛋白酶活性只是次要的。AT复合酶的产生是靠大量的细胞产物-肝素来刺激的[Rosenberg,R.D.,and Damus,P.S.(1973)J.Biol.Chem.248,6490-6505]。内皮细胞表面硫酸乙酰肝素粘蛋白(HSPG)的功能可能是通过AT加速凝血酶的钝化，从而出现血管的非凝血酶特征。HSPG的生成率主要受微粒体活动的动态控制，硫酸乙酰肝素(HS)转化活动和硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶三个因素的限制，其中最主要的的限制因素是硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶(3-OST)[Shworak,N.W.,Fritze,L.M.S.,Liu,J.,utler,L.D.,and Rosenberg,R.D.(1996)J.Bio 1.Chem.271,27063-27071]。HS按照功能不同可分为活性HS前体和非活性HS前体[Liu,J.,Shworak,N.W.,Fritze,L.M.S.,Bedlberg,J.M.,andRosenberg,R.D.(1996)J.Bio 1.Chem.271,27072-27082]。活性HS前体的AT结合位点因为没有葡糖胺3-O-硫酸盐基团而呈现出寡聚糖结构。3-OST可能是高尔基内腔的居留者，但它没有细胞质结构域。而且其疏水前导序列两侧没有带正电的氨基酸残基，包含两个疏水氨基酸残基(Gln)，缺乏足够的跨膜长度形成α-转角，有一个信号肽分裂位点。催化不同底物的磺基转移酶的结构千差万别，但与硫酸盐底物相关的磺基转移酶的相似性最大[Weinshillboum,R.M.,Otterness,D.M.,Aksory,I.A.,Wood,T.C.,Her,C.,andRaftogia nisb,R.B.(1997)FASEB J.11,3-14]。几乎所有的的3-OST都有一个同源的C末端结构域，大约260个氨基酸残基。同源区域并不存在许多磺基转移酶常见的GXXGXXK基元，存在GXXXXGK(S/T)基元，参与PAPS结合。还有一个半胱氨酸环(311-316氨基酸残基)所包含的序列与磺基转移酶Ⅳ的GGKLEKC基元相似，该区域靠近激活位点。因此，这个半胱氨酸环所形成的完整的二硫键是3-OST酶活性所必须的。

3-OST的表达异常将会导致血管功能失常，从而进一步影响血液循环。

本发明人的多肽与3-OST在蛋白水平上有69％的相似性和47％的一致性，并且具有3-OST家族所共有的特征性序列片段。基于以上各点，故认为本发明的新基因与编码3-OST相似，命名为硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶19，并以次推测其具有相似的生物学功能。

由于如上所述硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶19蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶19蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶19蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽--硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶19以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶19的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶19的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶19的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽--硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶19的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽--硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶19的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与硫酸乙酰肝素3-O-磺基转移酶19异常相关的疾病的方法。