[发明专利]一种新的多肽——人组织蛋白酶18和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——人组织蛋白酶18，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

半胱氨酸蛋白酶是一个蛋白水解酶家族。该家族在结构上都包括一个半胱氨酸位点、一个组氨酸侧链和一个天冬氨酸位点。这三个位点组成了催化活性位点。

现在已经发现了四种人半胱氨酸蛋白酶：组织蛋白酶B，组织蛋白酶L，组织蛋白酶H，组织蛋白酶S。它们最先以蛋白酶原的形式被合成出来，然后被加工成相应的蛋白酶并靶至溶酶体，并在此被加工成成熟的蛋白酶。有些溶酶体蛋白酶前体并不加入上述加工途径，而是分泌至胞外。因此，溶酶体半胱氨酸蛋白酶被发现被破骨细胞、激活的巨嗜细胞和I-细胞病病人的纤维原细胞所分泌。

组织蛋白酶在许多正常细胞生理活动中起重要作用，包括蛋白降解与更新、骨改建、激素前体加工等等。另外，半胱氨酸蛋白酶还参与许多病理过程，例如：风湿性关节炎、血管球性肾炎、阿尔兹海莫氏症等。

肿瘤与组织蛋白酶的关系十分密切。在不同组织来源的肿瘤细胞中，常常可以观察到多种组织蛋白酶的超量表达和分泌。例如，组织蛋白酶B在直肠癌、肺癌、子宫颈瘤和乳腺癌等癌症中超量表达，并且伴有活性增强，与膜结合性增高和分泌性强的特点。血清中组织蛋白酶B的含量可以作为多种癌症的检测标准。研究发现，组织蛋白酶H会使一些具有生理活性的多肽失活。另外，组织蛋白酶G的作用途径与磷酸脂酶C/激酶C的作用途径相关。组织蛋白酶的表达增高导致PKC调控途径的紊乱而的导致肿瘤。

癌症的浸润和转移也与组织蛋白酶有关。癌细胞侵入组织时首先要侵入细胞外基质，这是一个主动过程，癌细胞与基底膜紧密接触，并分泌蛋白溶解酶(包括组织蛋白酶等)将细胞外基质的成分，如层粘连蛋白、纤维粘连蛋白、蛋白多糖和胶原纤维等溶解，使基底膜产生局部的缺损。癌细胞即由此侵入周边组织中。在多种肿瘤细胞中发现的溶酶体组织蛋白酶分泌泡与此有关。

通过基因芯片的分析发现，在胸腺、睾丸、肌肉、脾脏、肺、皮肤、甲状腺、肝、PMA+的Ecv304细胞株、PMA-的Ecv304细胞株、未饥饿的L02细胞株、砷刺激1小时的L02细胞株以及前列腺组织中，本发明的多肽的表达谱与人组织蛋白酶29的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为人组织蛋白酶18。

由于如上所述人组织蛋白酶18蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人组织蛋白酶18蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人组织蛋白酶18蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——人组织蛋白酶18以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码人组织蛋白酶18的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码人组织蛋白酶18的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产人组织蛋白酶18的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——人组织蛋白酶18的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——人组织蛋白酶18的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与人组织蛋白酶18异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO:2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。

更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种：(a)具有SEQ ID NO:1中877-1362位的序列；和(b)具有SEQ ID NO:1中1-1932位的序列。