[发明专利]一种T－淋巴细胞培养方法

说明书

本发明涉及一种细胞的培养方法，特别是一种淋巴细胞的培养方法。

现有技术中T-淋巴细胞的培养方法，需要进行细胞分离，操作过程复杂。

本发明的T-淋巴细胞培养方法克服了现有技术的不足，操作简单，而且用血量少。

本发明的T-淋巴细胞培养方法，适用于使用自制的T-淋巴细胞培养液进行的T-淋巴细胞培养，有关自制T-淋巴细胞培养液的组成、配方及其制备方法，已另行申请发明专利，所述自制T-淋巴细胞培养液的组成成分及配制1000克培养液的用量为：

N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-2-乙烷磺酸(Hepes)    3-6g

碳酸氢钠                                  1-3g

RPMI  1640培养基(以干粉量计)              5-10g

L-谷氨酰胺(LG)                            0.1-0.3g

肝素钠(150u/mg)                           0.1-0.3g

植物血凝素(PHA)                           5-20mg

胎牛血清                                  100-300ml

青霉素(80万u/2ml)                         0.1-0.5ml

链霉素(100万u/2ml)                  0.1-0.5ml

余量用蒸馏水补齐。

该培养液的PH值为6.5-7.5。

本发明的T-淋巴细胞培养方法及其步骤为：

(1)取上述冰冻的T-淋巴细胞培养液，在室温下解冻；

(2)抽取静脉血注入盛培养液的容器内，立即将两者混匀，血量与培养液的体积比为1∶8-12；

(3)将上述容器置于37℃±0.5℃培养箱中，48-96小时后即完成细胞培养。

在实施本发明的过程中，所使用的器皿及其它用具均需要消毒灭菌处理，而且所有操作均应符合无菌操作，消毒灭菌方法和无菌操作方法均属于本领域的公知技术。

本发明的T-淋巴细胞培养方法与现有技术相比具有如下优点：

(1)用血量少，仅需要0.4-0.5ml血样，而现有技术一般需要5-10毫升；

(2)方法简便、省时、易操作、设备简单，而现有技术中需要用淋巴细胞分离液做淋巴细胞分离，而且需要较昂贵的二氧化碳培养箱，操作繁琐、费时、仪器昂贵。

下面结合实施例进一步说明本发明：

步骤一、取组成成分及配制1000克培养液的用量如下的T-淋巴细胞培养液：

Hepes                                 4.76g

碳酸氢钠                              1.6g

RPMI 1640培养基                       8.32g

L-谷氨酰胺(LG)                        0.3g

肝素钠(150u/mg)                       0.1g

美国sigma生产的PHA-P                  10mg

青霉素(80万u/2ml)                     0.35ml

链霉素(100万u/2ml)                    0.3ml

胎牛血清                              200ml

余量用蒸馏水补齐。

该培养液的PH值为7.0-7.2。

步骤二、依下列方法及步骤进行T-淋巴细胞的培养：

(1)室温下将上述4ml冰冻的淋巴细胞培养液解冻；

(2)抽取静脉血0.4-0.5ml注入盛培养液的容器内，立即将两者混匀；

(3)将上述容器置于37℃±0.5℃培养箱中，72小时后即完成细胞培养。

依此方法，T-淋巴细胞转化率达80％以上，而且胞核涨大，核仁分裂。