[发明专利]人肿瘤坏死因子α口服剂

说明书

本发明涉及一种口服剂，具体地说，本发明涉及一种人肿瘤坏死因子α口服剂。

肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factorα简称TNFα)是由激活的单核巨噬细胞产生的一种多功能细胞因子。人的有活性的TNFα由3个分子量为17KDa的非糖蛋白单体构成单体呈片层折叠结构，它们之间通过一个Cys69—Cys101间的二硫键非共价组成体。不同种属哺乳动物来源的TNFα在一级结构上具有极高的同源性，在生物学活性上也无明显的种属特弃性。纯化的TNFα等电点在5.3左右；pH6-8时稳定；对酸敏感：对蛋白水解酶(胰蛋白酶、糜蛋白等)敏感；50％的饱和硫酸铵可使其沉淀。在反复冻融和无保护剂时，室温下失活。

TNFα基因为单拷贝基因。人的基因大小为2.67kb，定位于人第6号染色体。基因组由4个外显子和3个内含子组成；编码一个由233个氨基酸组成的前体蛋白、其前76个氨基酸为信号肽、使TNFα前体能跨膜存在于细膜上，通过降解后，分出含157个氨基酸的成熟蛋白、糖基化。人TNFα基因第1外显于编码81％的信号肽，第4外显子编码89％成熟型TNFα氨基酸序列。

用TNFα对肿瘤作临床的免疫治疗是十几年来发展较快的新型抗瘤疗法、对临床手术、放疗、化疗等常规手段是有效补充。这在美国、日本和德国都取得了较好的进展。美国的Genentech公司在临床试验中用TNFα治疗乳腺癌、肺癌、结肠癌等方面居领先地位；Cetus公司把TNFα和IL—2联用开创了复合生物反应调节剂法。日本的重组产品已进入临床试验，对胸、腹水晚期转移癌、大肠癌、胆囊癌等取得了好的进展。德国BASF公司年产可达500g，德国用TNFα在胃肠道肿瘤、肝癌、卵巢肿瘤、乳腺癌等方面取得了成功，尤其在控制癌性胸腹水方面的疗效居世界前列。我国卫生部1998年初已批准上海、西安的5家单位开始临床试验。

临床上给药途径早年多为静脉、肌肉和皮下注射，近年来为了减轻TNFα的毒性，常采用局部注射或局部灌注方法，治疗中、晚期肿瘤。给药量从10μg/m²到400μg/m²。较多的治疗方案是2周为1疗程，每个疗程中连续5天给药，每天给50μg/m²。给药量主要取决于药效，通常80万单位/m²有效。

虽然1975年巳分离、纯化了TNFα，并阐明了结构，1985年已经用大肠杆菌基因工程得到了TNFα的重组产品；但是至今TNFα还停留在临床阶段，世界各国的医药行政部门都未批准TNFα作为商品药，在市场上出售。这主要由于从最初的临床试验时发现，TNFα有严重的全身毒性作用，对人的毒性作用要比小鼠高20倍。

这种毒性作用主要表现在：发热(35—100％)，寒颤(70—100％)，恶心头痛(20—70％)。乏力(20—77％)、食欲下降(24—46％)，；还发生腹泻、血小板降低、白细胞减少、GTP上升、体液潴留、肌痛，甚至内毒素性休克。这就大大限制了了TNFα的临床应用剂量，严重影响其治疗肿瘤的效果。

至今能选择性地、又直接杀伤肿瘤的药物很少，癌症的死亡率仍高于其他各种疾病。TNFα被发现后大家对其抱有极大的希望。但全身毒性的严重性，限制了它的应用。十几年来各国学者正在千方百计降低TNFα的毒性，主要从两方面取得了一些进展：第一方面是改变给药途径。1990年前后，美国曾经试验用基因治疗，即把TNFα直接注入肿瘤组织。第二方面是用蛋白质工程技术对TNFα的结构进行改造，改构的目的是降低毒性和提高抗肿瘤。十几年来已突变成功了数十种TNFα的衍生物，其中有些毒性有明显得下降，而抗肿瘤活性有显著提高。虽然如此，各国仍然还在作临床试验。

针对目前存在的上述问题，本发明采用了蓝藻基因工程的方法以蓝藻为重组TNFα的宿主生产肿瘤坏死因子α。以降低毒性，并可直接作用于消化道的肿瘤。

本发明提供了一种人肿瘤坏死因子α口服剂，含有表达人肿瘤坏死因子α(hTNFα)的念珠藻。