[发明专利]从植物黄花蒿中分离化合物东莨菪亭的方法

说明书

本发明涉及一种从植物黄花蒿(Artemisia annua)和其它植物科中分离用作氧化氮合成抑制剂的化合物东莨菪亭的方法。东莨菪亭属于香豆素类化合物。东莨菪亭(7-羟基-6-甲氧基香豆素)是苯并-α-吡喃酮香豆素的一种衍生物，已发现它在植物中以游离状态和苷类两种形式存在。

天然香豆素类对活的生物体具有不同的和显著的作用。香豆素类具有许多药理和生理活性如抗菌、血管舒张和利尿作用、抗凝血特性、保护肝脏和呼吸兴奋。东莨菪亭显示出了非常好的生长抑制特性(Shilling D G和Yoshikawa F,Amerchem.Soc.Symp Series,330:335-342)。最近据报导东莨菪亭在鼠的巨噬细胞中显示出了对氧化氮(NO)合成的抑制作用。巨噬细胞在最终防御感染和肿瘤发展方面起重要作用，并且这种活性是通过产生几种中间物来调节的。巨噬细胞产生氧化氮能够调节杀死肿瘤细胞、细菌、真菌和寄生虫或其生长抑制剂。所以开发一种有效并经济的东莨菪亭的来源、iNOs的抑制剂对将来进行有效治疗和商业应用是有价值的(Tai-Hyun Kang等：东莨菪亭：来自矮蒿中的一种可诱发NO合成抑制性活性组份，P1anta Media,65:400-403,1999；来自Ttraxinus rhynchobhyeli的体外可诱发NO合成抑制性活性成分，PlantMedia,65:656-658,1999)。

东莨菪亭广泛分布于植物王国中并可从植物的不同部位(根、果、叶、茎等)中分离得到，但发现几种相关成分经常的共存从而使得分离困难。通常，香豆素类的分离最初取决于用极性递增的溶剂对干燥植物进行的连续提取，常用的溶剂为石油醚(pet ether)、苯、乙醚、丙酮或甲醇。

用于分离香豆素类的常规方法是用95％甲醇/乙醇提取干燥的粉状物质并用10％碱性溶液处理浓缩过的提取液。用乙醚提取碱性溶液以除去脂肪物质。酸化含水溶液并用乙醚或氯仿提取得到粗的香豆素类。通过硅胶或矾土的柱层析法进一步纯化得到纯的香豆素类。用升华方法能够从植物组织中分离到特定的香豆素类(如umbilliferon、东莨菪亭)(Abu-Mustafa,E.A.；E1-Tawil,B.A.H.和M.B.E.Fayez；Phytochemistry,3,701(1964))。

尽管如此，通过酸碱处理分离香豆素的方法还是不理想的，这是因为几乎不能防止某些香豆素类的降解，从而导致分离出的是人工产物而不是原始的化合物或者造成化合物损失。在另外一种方法中，通过升华进行的纯化包括形成人工产物的热降解。总回收量下降。因此未曾报道过用于商业开发的高东莨菪亭含量的植物和任何大规模分离东莨菪亭的方法。

本发明的一个目的是开发具有高东莨菪亭含量的新植物/植物部位。

本发明的另一目的是选择用于选择性提取东莨菪亭的溶剂。

本发明的又一目的是开发一种分离纯东莨菪亭的经济的方法。

因比，本发明提供了一种从植物黄花蒿和其他植物科中分离氧化氮合成抑制剂化合物东莨菪亭的方法，它包括用含水乙腈溶剂提取粉状植物部位，用氯化溶剂分配，在蒸发溶剂、残余物层物和结晶之后得到纯东莨菪亭。方法的新颖性

1．选择提取东莨菪亭的植物部位，提高了产量并减少了工艺成本。

2．用含水乙腈提取该植物部位比使用其他极性溶剂如甲醇或乙醇更经济并具有更优的东莨菪亭产量。

3．在该方法中，通过避免任何酸碱处理来分离东莨菪亭从而提高产量。

4．将东莨菪亭选择性地从含水提取液转到卤化的非极性相中，从而易于纯化和分离纯的东莨菪亭。

5．在层析前纯化粗提取物得到50％的东莨菪亭结晶。

6．该方法可以重复使用溶剂和硅胶。

7．这些优点是对大规模生产东莨菪亭来说具有显著的经济价值。

本发明提供了一种从黄花蒿和其他植物科中分离用作氧化氮合成抑制剂的化合物东莨菪亭的方法，该方法包括a)以1∶5的比例用含水乙腈溶剂提取不同植物部位的干燥粉状物6-8小时，b)真空浓缩提取过的溶剂到其原始提取液的30％，c)用卤化溶剂分配浓缩的提取液从而把东莨菪亭转入非极性卤化溶剂中，d)在无水硫酸钠上把卤化溶剂干燥并蒸发溶剂，e)在甲醇中将残余物结晶并过滤晶体，f)浓缩滤液并在硅胶上进行层析，g)在氯仿甲醇混合液中洗脱东莨菪亭，结晶含有东莨菪亭的级分得到纯的东莨菪亭化合物。