[发明专利]具抗肿瘤活性的马氏珠母贝全脏器糖蛋白、糖胺聚糖及其提取工艺

说明书

本发明涉及从马氏珠母贝全脏器提取的糖蛋白、糖胺聚糖，及其提取工艺，上述糖蛋白、糖胺聚糖化合物具有抗肿瘤、抗凝等活性，可作为抗肿瘤药的医药组合物。

恶性肿瘤严重危害人类的健康，而抗癌化疗药都呈现出一定的毒性。从动、植物中提取一些具有抗肿瘤活性的天然化合物，用于生产高效低毒的抗肿瘤药物是抗肿瘤药物研究的一个方向。珍珠为名贵中药，有报道珍珠层粉对小鼠肉瘤S-180有抑制作用，作为育成珍珠和珍珠层的母体—珠母贝全脏器，是否也含有相同或相似作用的糖蛋白、糖胺聚糖化合物，未有研究报道。本研究组已证实马氏珠母贝全脏器的提取物具有显著的抗癌作用，其单独应用有显著抑制肿瘤细胞的增殖作用，与其它化疗药合用可显著增敏化疗药的抑瘤作用，同时对抗其抑制免疫的不良反应。

本发明的目的在于从马氏珠母贝全脏器提取一种或数种具有抗癌活性的天然化合物，确定其化学本质及结构特征，了解其理化特性，为临床医学提供一种新的抗肿瘤药物。

本发明涉及从马氏珠母贝全脏器提取的糖蛋白、糖胺聚糖二类化合物。这二类化合物是从马氏珠母贝全脏器提取，纯化后经化学组成测定、气相色谱分析  红外光谱分析、高效液相色谱分析鉴定证实其化学本质及结构特征的。

本研究组从马氏珠母贝全脏器提取糖蛋白、糖胺聚糖的工艺为：马氏珠母贝全脏器冻融、盐溶、有机溶剂沉淀或用等体积丙酮浸泡脱脂，滤除丙酮液后烘干粉碎，用胃酶、胰酶或胰酶、枯草杆菌中性蛋白酶酶解，灭酶后用硅藻土、活性碳(2∶3)脱色，经有机溶剂(丙酮、乙醇、醋酸乙酯)沉淀后干燥成粉末；上述粉末用1.0％活性碳及0.5％硅藻土脱色，pH2.0及pH7.0除杂蛋白及透析脱盐，透析液用60％乙醇-乙酸钠沉淀及5％CTAB沉淀所得级分再经60％乙醇-乙酸钠沉淀及5％CTAB络合，得一系列化合物。主要级分经化学组成测定：氨基己糖含量为52.5％，其中氨基半乳糖含量为34.3％，己糖醛酸含量为7.3％；经醋酸纤维素薄膜电泳显示为单一区带，R_f在0.3～0.4之间；经抗肿瘤试验结果显示：对体内S-180肉瘤和艾氏腹水癌有显著增敏阳性对照药的抑瘤作用，抑瘤率分别达61.96％与46.3％；对体外培养HL-60细胞有一定的杀伤作用；同时，抗凝血实验结果显示：提取物有一定的抗凝作用，抗凝效果为肝素的二百分之一。

上述两种化合物作为医药组合物，特别是抗肿瘤的药理活性，是通过下述实验证实的。

实施例一：

1、材料与方法：

马氏珠母贝全脏器糖胺聚糖：由权利要求书所述工艺提取而得。

台盼兰、5-Fu、替加氟。

KM小鼠：由广东医学院实验单位中心提供，普通级，体重20±2g，雌雄各半。

移殖性肿瘤：S₁₈₀肉瘤和艾氏腹水癌(EAC)由中山医科大学肿瘤研究中心提供，广东医学院药理教研室肿瘤研究小组常规传代培养。

无菌条件下，两次实验分别抽取S₁₈₀和艾氏腹水癌(EAC)腹水液，用N.S以1∶1稀释(台盼兰染色计数为8.0×10⁶个/ml和6.5×10⁶个/ml)，无菌接种(每鼠0.2ml)于KM小鼠右腋下。接种后次日随机分成生理盐水组、阳性对照组(5-FU或替加氟)、低剂量受试药组(马氏珠母贝全脏器糖胺聚糖)、高剂量受试药组(马氏珠母贝全脏器糖胺聚糖)、及阳性对照药与受试药合用组共五组。每组小鼠分别灌胃给药(0.1ml/10g体重)，连续10天，第11天处死，称体重，解剖取肉瘤称重。

2、实验结果

马氏珠母贝全脏器糖胺聚糖对S₁₈₀肉瘤和艾氏腹水癌(EAC)的抑瘤作用见表1、2。

表1.马氏珠母贝全脏器糖胺聚糖对S₁₈₀的抑瘤作用组别            剂量  动物数          体重             瘤重         抑瘤