[发明专利]一制胰脂菌素的提纯方法

说明书

本发明涉及一种一制胰脂菌素的提纯方法。更尤其，本发明涉及一种将双流萃取形式的液-液萃取与逆流萃取形式的反萃取结合起来的方法，作为将一制胰脂菌素以异常高的产率和纯度从粗一制胰脂菌素中分离出来的方法。

一制胰脂菌素作为关键中间体，用于在预防和治疗与肥胖症有关的疾病中有用的四氢一制胰脂菌素(THL，Orlistat)的制备，是极其重要的。

一制胰脂菌素，用于其生产的一种发酵方法，用于将其从微生物中分离出来的一种方法以及用于将其氢化成四氢一制胰脂菌素的一种方法已经知道，并且在例如美国专利No.4,598,089中被描述。

一制胰脂菌素被描述如下：

一种用于制备粗一制胰脂菌素的方法也已经在欧洲专利申请No.96106598中描述。此方法包括好氧培养放线菌目例如毒三素链霉菌的微生物，直至初始生长阶段基本完成，已经产生足够的细胞物质。微生物在基本不含脂肪和油的含水介质中产生一制胰脂菌素，并且该含水介质含有合适的碳和氮源以及无机盐。然后，将亚油酸与抗氧化剂一起，以及任选与辛酸和N-甲酰左旋亮氨酸或优选左旋亮氨酸一起加入到培养液中。发酵完成后，发酵液被萃取。生成的粗一制胰脂菌素可以例如通过色谱法被进一步浓缩和提纯，如在美国专利No.4,598,089中所描述的。

用以浓缩一制胰脂菌素的多级色谱方案或液-液萃取与用以获得纯净的一制胰脂菌素的多级色谱法相结合是用于提纯粗一制胰脂菌素的现有技术方法的特点。这些方法典型地应用于实验室规模的发酵代谢物的分离。但是，这些方法通常不适合于经济的、大规模的工艺。

通过蒸馏来提纯粗一制胰脂菌素的尝试失败了。一制胰脂菌素在60℃下可稳定几个小时，但因为其蒸汽压低(7×10^-7毫巴)，因此在这个温度下的真空蒸馏(＜2毫巴)是不可行的。在更高的温度下，一制胰脂菌素通过去除二氧化碳而降解。

粗一制胰脂菌素也能够通过一制胰脂菌素在低于-20℃的温度下结晶而提纯。但是低温结晶需要昂贵的技术设备，并且这种结晶的产率很大程度地取决于粗一制胰脂菌素的质量。尤其当粗一制胰脂菌素的质量差时，通过结晶获得的一制胰脂菌素产率低。

本发明提供一种新型的、简单的和价格便宜的用于从粗一制胰脂菌素中以高产率和纯度提纯一制胰脂菌素的方法，即使原材料的质量差。

用于从粗一制胰脂菌素中提纯一制胰脂菌素的本发明的方法包括：

a)一制胰脂菌素的液-液萃取，从选自脂族烃或芳香烃的一种非极性溶剂中萃取到选自羧酸、醇、O-单取代的单或寡乙二醇、二醇或偶极非质子传递溶剂的一种极性溶剂中，然后

b)用水稀释极性溶剂相或者改变相比率，并且将一制胰脂菌素反萃取到一种新鲜的非极性溶剂中。

提出以下的定义来解释和定义用于描述本发明的各种术语的意义和范围。

术语“双流萃取”是指两种溶剂逆流萃取。萃取按下图所示进行：

互溶度低的两种溶剂从萃取单元的顶部和底部引入。要被分离的混合物(进料)可以从任何地方引入，除非与冲洗溶剂结合，优选从萃取单元的中间位置引入。在上图中，萃取以那样一种方式进行，那就是萃取溶剂和萃取液各自都含有密度较高的溶剂(重相)，冲洗溶剂和萃余液各自都含有密度较低的溶剂(轻相)。

术语“逆流萃取”是指要被萃取的物质(进料)与所用的溶剂中的一种一起被加入。在那种情况下，杂质从将要被提纯的化合物中分离出来的程度不象在双流萃取的情况中那么高，因为冲洗区被省略。

逆流萃取按下图所示进行：

互溶度低的一种溶剂(与进料在一起)和另一种溶剂从萃取单元的顶部和底部引入。在一个出口，富含目标物质的萃取溶剂从柱中出来(萃取液)。在另一个出口，用于引入进料的溶剂(贫化了目标物质)(萃余液)，从柱中出来。在上图中，萃取被表明以那样一种方式进行，那就是进料和萃余液各自都含有密度较高的溶剂(重相)，用于萃取的溶剂和萃取液各自都含有密度较低的溶剂(轻相)。

术语“粗一制胰脂菌素”是指含有一制胰脂菌素和杂质的粗产物，来自发酵过程，在分离细胞物质、萃取和浓缩后产生。

本发明涉及将两种液-液萃取结合起来的一种方法，作为将一制胰脂菌素以高纯度和实际定量的产率从粗一制胰脂菌素中分离出来的方法。