[发明专利]海洋微生物发酵生产低温超氧化物歧化酶的方法在审
| 申请号： | 201210108710.7 | 申请日： | 2012-04-13 |
| 公开（公告）号： | CN102653737A | 公开（公告）日： | 2012-09-05 |
| 发明（设计）人： | 张庆芳;迟乃玉;窦少华;王晓辉;于爽;马莉 | 申请（专利权）人： | 大连大学 |
| 主分类号： | C12N9/08 | 分类号： | C12N9/08 |
| 代理公司： | 大连智慧专利事务所 21215 | 代理人： | 刘琦 |
| 地址： | 116622 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明所述的一种海洋微生物发酵生产低温超氧化物歧化酶的方法是将产生超氧化物歧化酶的海洋微生物进行定向驯化，使其在自然条件下生长良好；将定向驯化后的超氧化物歧化酶产生菌在8～14℃逐级扩大培养，按发酵液体积的4～10％接种量接入液体发酵培养基中，在8～14℃培养60～96h时，即海洋微生物发酵生产低温超氧化物歧化酶结束；发酵液在4,000～8,000rpm离心收集菌体，数次洗涤后收集沉淀，悬浮于缓冲液中，并加石英砂研磨，10,000～14,000rpm离心收集上清即为粗酶液；根据不同需要和使用对象不同，可以将粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。 | ||
| 搜索关键词： | 海洋 微生物 发酵 生产 低温 超氧化物歧化酶 方法 | ||
【主权项】：
一种微生物发酵生产低温SOD的方法，其包括以下步骤：(1)将产生超氧化物歧化酶的海洋微生物进行定向驯化，使其在自然条件下生长良好；(2)按常规方法将定向驯化后的超氧化物歧化酶产生菌在8～14℃逐级扩大培养，制备成液体一级种子和二级种子；(3)将液体一级种子或二级种子，按发酵液体积的4～10％接种量接入液体发酵培养基中，在8～14℃培养60～96h时，即海洋微生物发酵生产低温超氧化物歧化酶结束；(4)将(3)的发酵液4,000～8,000rpm离心收集菌体，用蒸馏水洗涤数次之后离心收集沉淀；(5)将沉淀悬浮于缓冲液中，加石英砂研磨破碎，10,000～14,000rpm离心，收集到的上清为超氧化物歧化酶粗酶液；(6)根据不同需要和使用对象不同，还可以将(5)得到的粗酶液进一步浓缩、分离纯化，制备成不同活性、纯度和剂型的酶制剂。
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