[发明专利]检测致病性大肠杆菌菌株的TaqManTM－PCR

摘要

本发明涉及一种检测样品中致病性大肠杆菌的方法，包括使用致病性大肠杆菌特异性的寡核苷酸引物将从所述样品中分离出的DNA进行PCR扩增。

主权项

1.一种检测样品中致病性肠细菌的方法，包括使用一组寡核苷酸引物对、具有5’-3’外切核酸酶活性的聚合酶、以及带有标记的寡核苷酸探针，针对从所述样品中分离的DNA进行PCR扩增，所述引物对允许通过扩增每组致病性大肠杆菌菌株特有的毒性因子/毒素基因而区分至少两组致病性大肠杆菌菌株，其中该组核苷酸引物对包括两个或多个选自下组的引物对：与编码热不稳定毒素，或热稳定毒素的基因杂交的用于肠产毒性大肠杆菌特有的DNA序列扩增的引物对；与编码热稳定毒素的基因杂交的用于肠聚集性大肠杆菌特有的DNA序列扩增的引物对；与pCVD432质粒杂交的用于肠聚集性大肠杆菌特有的DNA序列扩增的引物对；与inv质粒杂交的用于肠侵染性大肠杆菌特有的DNA序列扩增的引物对；与EAF质粒或eae基因杂交的用于肠致病性大肠杆菌特有的DNA序列扩增的引物对；与编码志贺氏样毒素sltI或sltII的基因杂交的用于肠出血性大肠杆菌特有的DNA序列扩增的引物对，所述带有标记的寡核苷酸，在最靠5’端的碱基处被荧光染料标记，在最靠3’端的碱基处被荧光猝灭染料标记，它在靶DNA内部杂交，所述带有标记的寡核苷酸探针，对所述聚合酶的5’-3’外切核酸酶降解作用敏感，被降解后产生通过荧光检测法可检测到的片段。