[发明专利]重组人源铜锌超氧化物歧化酶制备工艺

摘要

一种重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺，其特点是先进行工程菌发酵，发酵后收集菌体，然后将菌体裂解，分离包含体，采用巯基乙醇尿素变性剂进行抽提，经加热处理后用硫酸铜复性，并经DE-52离子交换层析纯化。本发明具有工艺流程简便、SOD产量高、单位成本低等特点，产品适用于医疗领域。

主权项

1.一种重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺，其特征是：(1)挑取工程菌的单菌落接种在装有含LB培养基的摇瓶中，30℃振荡培养10小时，转入装有含铜锌盐的培养基的发酵瓶中，30℃培养约10小时，再经IPTG诱导培养后收集菌体；(2)取菌体，用PH8.0，50mMTrisHCL-1mMEDTA-100mMNaCl(TES缓冲液)洗两遍，沉淀悬于相同缓冲液中，加溶菌酶，4℃作用30分钟，加脱氧胆酸钠(DOC)，待菌体破碎后加DNA酶降解，到破菌混合液不再粘稠时，离心弃上清，沉淀用缓冲液洗两遍，将沉淀溶于PH8.0，浓度50mmolTrisHCL-10mmol巯基乙醇-8M尿素，加PMSF到2mM，65℃加热10分钟；(3)取以上尿素抽提液用硫酸铜复性液透析复性；(4)DE-52柱层析：复性混合物离心除去沉淀物，取上清用100mM磷酸钠缓冲液PH7.8透析平衡，然后加上经同样平衡液平衡好的DE-52柱，用平衡液洗下杂蛋白后，用氯化钠梯度洗脱，收集SOD活性峰，超滤浓缩，脱盐，冷冻干燥。