[发明专利]甲型肝炎病毒培养工艺

摘要

一种生产病毒疫苗的基于微载体的工艺，其中一项实例为甲型肝炎病毒，该工艺包含由玻璃包被的聚苯乙烯微载体和MRC-5细胞组成的聚集的微载体系统，该系统为病毒在甚至是延长的感染期的繁殖创造了稳定的环境。按照本工艺的微载体聚集体避免了在其它系统中见到的在长时间培养中细胞从珠上的脱落，从而达到在微载体培养中的高产率。当病毒的产率可通过在延长的感染期创造稳定的培养物而增加时即可应用本方法。可规模扩大的搅拌的生物反应器被用于替代多个平行固定表面生物反应器。这种聚集的微载体工艺消除了固定表面生物反应器的容积限制，它保护病毒在其上培养的细胞免受切应力破坏，它提供增强的细胞对细胞相互作用，它为病毒生长提供稳定的环境，它为营养物通过聚集体对流运输提供空腔，并且它提供一种收获病毒溶胞产物以进行下游加工的直接方法。

主权项

1.一种在聚体的微载体--细胞培养物中生产大量病毒的方法，它包含，维持细胞群于聚集的和附着的状态，使细胞不从微载体上脱落，甚至直至延长的感染期，以生产商业量的病毒疫苗抗原，它包括下列步骤：a)通过水化，灭菌和平衡生物反应器中培养液中玻璃包被的微载体制备玻璃包被的微载体，适于培养对将被用作疫苗抗原的病毒的感染易感的细胞；b)以足以获得细胞对微载体的一致附着以保证基本每个微载体至少附着一个细胞的浓度将细胞种植于适当的培养液中，使用等于临界离底悬浮速度(COBSR)的搅拌速度和允许有结构的聚集体形成的pH和温度；c)培养此种植和附着的细胞至晚对数和早平台期，进行pH控制并充分补充培养液以提供足够的细胞营养，并控制聚集体大小和控制搅拌速度，使之慢至可允许有效的微载体--细胞聚集体形成，但快至可维持所有微载体的悬浮(即，COBSR)；d)用病毒感染晚对数或早平台期的微载体--细胞聚集体，并使病毒生长足够长时间以在收获时获得最大病毒产量；e)从聚集的微载体细胞培养物收获和回收病毒。