[发明专利]一种金枪鱼鱼精蛋白的制备方法在审
| 申请号： | 201910881730.X | 申请日： | 2019-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN110467662A | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 赵文浩;赵玉勤;迟长凤;其他发明人请求不公开姓名 | 申请（专利权）人： | 浙江海洋大学 |
| 主分类号： | C07K14/46 | 分类号： | C07K14/46;C07K1/30;C07K1/18 |
| 代理公司： | 33213 杭州浙科专利事务所(普通合伙) | 代理人： | 吴秉中<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 316100 浙江省舟山市普陀区*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明关于一种金枪鱼鱼精蛋白的制备方法，包括：1)金枪鱼精巢匀浆，以乙酸乙酯浸泡，搅拌后过滤烘干并粉碎；2)金枪鱼鱼精干燥粉末中加入NaCl和柠檬酸钠的混合溶液，均质匀浆后低速搅拌，静置后高速离心分离取沉淀；3)在步骤2)的沉淀物中加入硫酸溶液提取，上清液过滤；用冷乙醇沉淀，沉淀用丙酮洗涤后冷冻干燥得粗品；4)粗品配成溶液注入CM Sephaorse CL‑6B洗脱纯化冷冻干燥即得纯品。本发明方法制备金枪鱼鱼精蛋白得率可达15％以上，纯品蛋白浓度高，氨基酸总量可达77％左右，鱼精蛋白中和肝素时效价大概是标品对照品的2/3，测定RSD小于5％，符合各国药典的规定，可用作安全的肝素解毒剂。 | ||
| 搜索关键词： | 金枪鱼 鱼精蛋白 粗品 制备 沉淀 高速离心分离 硫酸溶液提取 氨基酸总量 后冷冻干燥 冷乙醇沉淀 上清液过滤 丙酮洗涤 低速搅拌 干燥粉末 混合溶液 均质匀浆 柠檬酸钠 乙酸乙酯 中和肝素 对照品 解毒剂 烘干 标品 得率 肝素 精巢 可用 洗脱 匀浆 过滤 浸泡 蛋白 安全 | ||
【主权项】：
1.一种金枪鱼鱼精蛋白的制备方法，其特征在于包括以下步骤：/n1)预处理：金枪鱼精巢室温解冻、匀浆，以乙酸乙酯浸泡，间歇性高速搅拌24h，过滤烘干，最后粉碎；/n2)盐匀浆：金枪鱼鱼精干燥粉末中加入0.1～0.12MNaCl和0.08～0.12M柠檬酸钠的混合溶液，均质匀浆后低速搅拌，静置后高速离心分离并取沉淀；/n3)酸解：在步骤2)的沉淀物中加入硫酸溶液提取，0℃下以4800～6000r/min离心10min，上清液过滤；用三倍体积的冷乙醇沉淀，沉淀用丙酮洗涤两次，冷冻干燥，得鱼精蛋白粗品；/n4)纯化：鱼精蛋白粗品配成溶液注入CM Sephaorse CL-6B，以含有NaCl的CH3COOH-CH3COONa溶液进行线性梯度洗脱，以4mL/管收集，合并每次收集的相同洗脱峰，透析除盐24h后，减压旋蒸，冷冻干燥即得鱼精蛋白纯品。/n
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