[发明专利]一种从临床血液中检测肺炎克雷伯菌病原菌的方法在审
| 申请号： | 201910861060.5 | 申请日： | 2019-09-12 |
| 公开（公告）号： | CN110423837A | 公开（公告）日： | 2019-11-08 |
| 发明（设计）人： | 李敬;王旭;孙宝林;郭建;吴谨 | 申请（专利权）人： | 卓源健康科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 合肥顺超知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 34120 | 代理人： | 张芳 |
| 地址： | 230088 安徽省合肥市高新区望*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种临床血液中检测肺炎克雷伯菌病原菌的方法，包括以下步骤：S1、血液中肺炎克雷伯菌基因组DNA的提取；S2、血液中肺炎克雷伯菌PCR检测：S2.1、利用肺炎克雷伯菌基因组DNA序列设计一段特异性的PCR引物，包括如SEQ ID NO.1所示的正向引物和SEQ ID NO.2所示的反向引物；引物所扩增的目的片段长度为411bp；S2.2、以步骤S1中从血液中提取的肺炎克雷伯菌基因组DNA为模板，采用特异性的PCR引物进行PCR扩增；S2.3、对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳及检测，扩增出长度为411bp的片段则判定为检测出肺炎克雷伯菌病原菌。本发明对血液中肺炎克雷伯菌的检测极限达到10CFU/mL。本发明不仅提高了血液中肺炎克雷伯菌感染的检测灵敏度，而且缩短了检测周期。 | ||
| 搜索关键词： | 肺炎 病原菌 检测 血液 基因组DNA 临床血液 扩增 琼脂糖凝胶电泳 基因组DNA序列 检测灵敏度 反向引物 目的片段 正向引物 引物 判定 感染 | ||
【主权项】：
1.一种从临床血液中检测肺炎克雷伯菌病原菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、血液中肺炎克雷伯菌基因组DNA的提取；S2、血液中肺炎克雷伯菌PCR检测：S2.1、利用肺炎克雷伯菌基因组DNA序列设计一段特异性的PCR引物，该特异性的PCR引物包括如SEQ ID NO.1所示的正向引物和SEQ ID NO.2所示的反向引物；其中，SEQ ID NO.1：5’‑GTTGTTCCCGTTATGTCTGGTGC‑3’；SEQ ID NO.2：5’‑GCTATCAGCGCCACGTTAGC‑3’；引物所扩增的目的片段长度为411bp；S2.2、以步骤S1中从血液中提取的肺炎克雷伯菌基因组DNA为模板，采用步骤S2.1中的特异性的PCR引物进行PCR扩增；S2.3、对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳及检测，扩增出长度为411bp的片段则判定为检测出肺炎克雷伯菌病原菌。
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