[发明专利]一种鉴别微量体液斑的组织来源的方法

摘要

本发明提供了一种鉴别微量体液斑的组织来源的方法，属于法医技术领域，采用FTA卡采集微量体液斑；将所述体液斑进行裂解并直接逆转录获得全长cDNA，对所述cDNA进行预扩增，得到预扩增产物；将预扩增产物进行纯化，将得到的纯化产物采用特异性位点的引物组合进行PCR扩增，根据扩增产物中的特异性位点的表达情况，判断体液斑的组织来源。本发明使用FTA卡采集微量体液斑后，将所有样本直接进行裂解及逆转录，最大程度上减少cDNA的损失，再结合其它方法实现了对微量体液斑的组织来源的鉴别，对微量体液斑的灵敏度达到1pg。

主权项

1.一种鉴别微量体液斑的组织来源的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)采用FTA卡采集微量体液斑；2)将所述步骤1)得到的微量体液斑进行裂解并直接逆转录获得全长cDNA，对所述cDNA进行预扩增，得到预扩增产物；3)将所述步骤2)得到的预扩增产物进行纯化，将得到的纯化产物采用特异性位点的引物组合进行PCR扩增，根据扩增产物中的特异性位点的表达情况，判断体液斑的组织来源；所述特异性位点包括HBB、ALAS2、BPIFA1、HTN3、STATH、MMP7、MMP10、PRM1、SEMG1、CYP2B7P1、IL1F7和CCL27；扩增HBB的引物包括HBB上游引物和HBB下游引物，所述HBB上游引物具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，所述HBB下游引物具有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；扩增ALAS2的引物包括ALAS2上游引物和ALAS2下游引物，所述ALAS2上游引物具有SEQ ID No.3所示的核苷酸序列，所述ALAS2下游引物具有SEQ ID No.4所示的核苷酸序列；扩增BPIFA1的引物包括BPIFA1上游引物和下游引物，所述BPIFA1上游引物具有SEQ ID No.5所示的核苷酸序列，所述BPIFA1下游引物具有SEQ ID No.6所示的核苷酸序列；扩增HTN3的引物包括HTN3上游引物和HTN3下游引物，所述HTN3上游引物具有SEQ ID No.7所示的核苷酸序列，所述HTN3下游引物具有SEQ ID No.8所示的核苷酸序列；扩增STATH的引物包括STATH上游引物和STATH下游引物，所述STATH上游引物具有SEQ ID No.9所示的核苷酸序列，所述STATH下游引物具有SEQ ID No.10所示的核苷酸序列；扩增MMP7的引物包括MMP7上游引物和MMP7下游引物，所述MMP7上游引物具有SEQ ID No.11所示的核苷酸序列，所述MMP7下游引物具有SEQ ID No.12所示的核苷酸序列；扩增MMP10的引物包括MMP10上游引物和MMP10下游引物，所述MMP10上游引物具有SEQ ID No.13所示的核苷酸序列，所述MMP10下游引物具有SEQ ID No.14所示的核苷酸序列；扩增PRM1的引物包括PRM1上游引物和PRM1下游引物，所述PRM1上游引物具有SEQ ID No.15所示的核苷酸序列，所述PRM1下游引物具有SEQ ID No.16所示的核苷酸序列；扩增SEMG1的引物包括SEMG1上游引物和SEMG1下游引物，所述SEMG1上游引物具有SEQ ID No.17所示的核苷酸序列，所述SEMG1下游引物具有SEQ ID No.18所示的核苷酸序列；扩增CYP2B7P1的引物包括CYP2B7P1上游引物和CYP2B7P1下游引物，所述CYP2B7P1上游引物具有SEQ ID No.19所示的核苷酸序列，所述CYP2B7P1下游引物具有SEQ ID No.20所示的核苷酸序列；扩增IL1F7的引物包括IL1F7上游引物和IL1F7下游引物，所述IL1F7上游引物具有SEQ ID No.21所示的核苷酸序列，所述IL1F7下游引物具有SEQ ID No.22所示的核苷酸序列；扩增CCL27的引物包括CCL27上游引物和CCL27下游引物，所述CCL27上游引物具有SEQ ID No.23所示的核苷酸序列，所述CCL27下游引物具有SEQ ID No.24所示的核苷酸序列。