[发明专利]防治三七根腐病的木霉菌株筛选方法

摘要

本发明公开一种防治三七根腐病的木霉菌株筛选方法，具体包括以下步骤：步骤1，分离三七根际土中的木霉菌株；步骤2，鉴别获得的木霉菌株种类；步骤3，检测获得的木霉菌株对皂苷的敏感程度；步骤4，检测木霉菌株对根腐病病原菌的抑制效果；步骤5，检测木霉菌株的次生代谢产物对根腐病病原菌的抑制效果；步骤6，验证筛选出的木霉菌株对三七根腐病的防治效果；本发明通过从三七根际土中获取木霉菌株，减少了木霉菌株筛选的工作量，通过全面的系统化检测筛选出对根腐病防止效果较好的木霉菌株，将筛选结果应用于三七根腐病防治，能获得较好的作用效果。

主权项

1.防治三七根腐病的木霉菌株筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，从三七植株的根际土中分离木霉菌株；采集新鲜的三七植株，抖去三七植株的根围土，使用毛刷刷下三七植株根部的根际土，称取1g根际土溶于10mL无菌蒸馏水中，将溶液置于37℃、转速为180rpm的摇床上摇晃2～3min获得原液，将原液稀释成质量浓度分别为10^‑2g/mL、10^‑3g/mL、10^‑4g/mL、10^‑5g/mL的稀释液，量取0.2mL各质量浓度的稀释液涂布在孟加拉红培养基平板皿中，重复三次，将孟加拉红培养基平板皿置于25℃～28℃的培养箱中培养5d～7d，待菌落长出后，用接种针分离菌落，并将获得的单菌落转接至马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板进行纯化培养，将纯化的菌株转移至PDA斜面于4℃下保藏；步骤2，使用真菌通用引物ITS1、ITS4对木霉菌株的rDNA‑ITS区进行PCR扩增，对扩增产物进行DNA序列测序，对测序结果进行BLAST序列对比和同源性分析，确定纯化木霉菌株的种类；步骤3，检测木霉菌株对皂苷的敏感程度，筛选出在三七根际土中定植良好的木霉菌株；步骤4，检测木霉菌株对病原菌的抑制效果，筛选出抑菌效果良好的木霉菌株；步骤5，检测步骤3和步骤4共同筛选出的木霉菌株的次生代谢产物抑菌效果，筛选出次生代谢产物抑菌效果良好的木霉菌株；步骤6，将筛选出的木霉菌株用于瓶载三七的根腐病防治中，验证筛选的木霉菌株对三七植株根腐病的防治效果。