[发明专利]一种分离纯化猪血浆球蛋白的方法在审
| 申请号： | 201910754962.9 | 申请日： | 2019-08-15 |
| 公开（公告）号： | CN110467664A | 公开（公告）日： | 2019-11-19 |
| 发明（设计）人： | 杨海;唐青海;王芳宇;杨灿;刘会敬;唐姣玉;龚慧芳;张淇美 | 申请（专利权）人： | 衡阳师范学院 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C07K1/14;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/16;C07K1/18 |
| 代理公司： | 11638 北京权智天下知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 王新爱<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 421000 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种分离纯化猪血浆球蛋白的方法，包括：步骤一、富含球蛋白的沉淀制备：调节蛋白含量至5％；调节pH值以及温度；乙醇加入完毕后再调节PH；搅拌反应；用14.5％乙醇平衡液荡洗离心杯，离心杯预冷，制品离心，取上清液，将所述上清液降温至‑4.8～‑5.5℃后过滤，备用；步骤二、球蛋白的分离：球蛋白的制作分离；球蛋白压滤分离；步骤三、球蛋白的纯化。本发明仅对猪血浆球蛋白建立提取工艺，所得产品为单一蛋白；通过调控温度、pH等参数，综合利用乙醇沉淀和透析技术，目的蛋白具有高纯度和高提取率；采用的材料价格低廉，极大了降低成本；整个分离纯化过程不到10小时，分离效率高；猪血浆球蛋白为高附加值产品，可以显著提高猪血的利用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 球蛋白 猪血浆 分离纯化 离心杯 乙醇 高附加值产品 材料价格 沉淀制备 单一蛋白 分离效率 搅拌反应 目的蛋白 取上清液 压滤分离 乙醇沉淀 高纯度 平衡液 上清液 富含 透析 预冷 猪血 备用 过滤 蛋白 调控 制作 | ||
【主权项】：
1.一种分离纯化猪血浆球蛋白的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：/n步骤一、富含球蛋白的沉淀制备：/na、调蛋白含量：通过双缩脲法测定1000mL血浆中蛋白含量，用0.9％氯化钠稀释血浆至蛋白含量为5％；/nb、调pH值以及温度：检测稀释后的血浆pH值，并用1M/L柠檬酸调整PH到6.5-6.8，调节温度至1±0.5℃，加入乙醇；/nc、乙醇加入完毕后再调节PH为6.6±0.1；/nd、搅拌反应：温度控制在-4.5～-5.0℃，搅拌反应2小时，/ne、用14.5％乙醇平衡液荡洗离心杯，离心杯预冷至-3.0℃～-4.5℃，制品离心，取上清液，将所述上清液降温至-4.8～-5.5℃后过滤，备用；/n步骤二、球蛋白的分离：/na、球蛋白的制作分离：计量上清液的体积，启动搅拌系统，使温度降至-3℃～-4℃，每1L上清液加入1M氯化钠86mL，用0.5M氢氧化钠调pH为6.6-6.8，加入温度为-25℃～-20℃的95％乙醇，控制制品中最终乙醇的浓度为18％，反应温度-5.0℃～-6.0℃，搅拌反应时间为2-4小时；/nb、球蛋白压滤分离：干净的离心杯用18％平衡液荡洗一次，离心杯预冷至温度-4.0℃～-5.5℃，装入制品后开启离心机，离心温度保持在-4.0℃～-6.0℃，离心至上清液澄清，弃上清，得离心沉淀，备用；/n步骤三、球蛋白的纯化；溶解所述离心沉淀，用1M醋酸调PH为3.8-4.5，澄清过滤后脱醇，用0.5M盐酸调制品pH为3.60-3.70，制品蛋白浓度浓缩至6-8％，用7-8℃注射用水连续等体积透析，至电导率小于0.8ms/cm，制品按蛋白含量5.20-5.5％稀释，PH调节至3.8-4.4，加入山梨醇或葡萄糖4-6％加入，除菌分装。/n
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