[发明专利]徐香猕猴桃组培苗耐盐突变体的诱导方法

摘要

本发明属于农业育种技术领域，具体为徐香猕猴桃组培苗耐盐突变体的诱导方法，本方法以‘徐香’猕猴桃的新鲜且健康的叶片作为外植体，建立无菌组培体系，采用组织培养技术和EMS诱变相结合的方法获得EMS诱变植株，以NaCl作为耐盐筛选剂，对EMS诱变苗进行耐盐突变体筛选。该方法得到的耐盐‘徐香’猕猴桃植株适用于盐碱地环境，对提高土地利用率和及经济效益，以及对农林业生产率及其可持续性具有重要的意义。

主权项

1.徐香猕猴桃组培苗耐盐突变体的诱导方法，其特征在于通过以下步骤实现：1）建立无菌体系：采摘健康且生长旺盛的猕猴桃叶片，清洗叶片表面，同时对超净工作台、培养基及其他实验用品进行消毒，所述消毒液组合采用75%乙醇处理15秒，升汞处理4分钟；消毒后用无菌水充分的漂洗四到五次，每次无菌水用量以淹没外植体；2）愈伤组织诱导：将将叶片切成1cm×1cm的方块，叶面朝上接种到培养基中，所述培养基为MS+TDZ1.0mg/L+0.15IBAmg/L；轻轻按压使其贴合培养基，接种后放置于培养室中培养，先进行5天遮光暗处理，而后光照培养25天，形成愈伤组织；3）EMS诱导：将存活的愈伤组织接种到培养基中，所述培养基为琼脂4.5g/L+蔗糖30.0g/L，pH=5.8‑6.0；将磷酸缓冲液配置的EMS溶液过滤灭菌， 所述EMS溶液浓度为0.4g/L，采用添加法加入培养基，生长20天，得到经EMS诱导的植株；4）不定芽诱导分化：将生长良好的愈伤组织材料接种到培养基中，所述培养基为MS+6‑BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L，接种后放置于培养室中培养；5）耐盐植株筛选：将经EMS诱导存活下的愈伤培养成完整植株后，接入盐浓度1.0%的盐培养基中，所述培养基为MS培养基+1mg/LTDZ+0.15mg/LIBA+蔗糖25g/L+琼脂4.5g/L，pH为5.8，在含盐培养基生长15天后，再转入不含盐的增殖培养基中生长15天，如此进行耐盐筛选；交替培养3个周期，将存活下来的苗转至不含盐的增殖培养基复壮，得到香猕猴桃苗耐盐植株；6）生根诱导：选取生长势良好的组培苗接种到培养基中，所述培养基为MS+IBA0.75mg/L+AC0.30g/L，接种时去掉愈伤组织，截取茎段部分，接种后放置于培养室中培养；7）炼苗移栽：选用腐殖土：园土：草炭土按1:1:1混合的基质，将长势旺盛生根正常的组培苗移至自然光下进行生长10天后松动组培瓶盖，5天后将组培瓶瓶盖打开并用纱布掩住，再过5天后取出组培苗用流水将附着于根上的培养基冲洗干净，并用多菌灵溶液进行消毒泡洗5分钟，之后在阴凉环境下晾干表面水分，栽种到提前用多菌灵杀菌剂进行杀毒处理的不同的土壤基质中，所述土壤基质选用含腐殖土、园土、草炭土或蛭石中几种，放置于阴凉处，用塑料盖将花盆盖住，保持温度在26±3℃，喷施水雾湿度控制在80%以上。