[发明专利]一种辅助抗肿瘤复方石莼提取物及其制备技术

摘要

本发明公开了一种具有辅助抗肿瘤作用的复方石莼提取物的制备技术。该工艺流程特征在于利用超声波辅助提取，采用水提醇沉法分离出粗多糖成分，再脱蛋白和脱色素，经纯化后得到纯度高的石莼活性多糖，再利用过氧化氢及抗坏血酸氧化降解石莼多糖，经纯化后得到纯度高的石莼活性寡糖，并将石莼多糖及石莼寡糖混合使用。经动物药效学证实，所述复方石莼提取物在KM小鼠体内对H22肝癌瘤具有确切的杀伤能力，能抑制肿瘤的生长扩散，并对病变组织有一定的修复效果，且未具有明显副作用。本发明所述的复方石莼提取物是一种无毒性、副作用小、十分安全的生物活性物质，可以方便和药学上可接受的载体制备成各种剂型的药物。

主权项

1.一种具有抗肿瘤活性的复方石莼提取物的制备技术，其特征在于，包括以下步骤：（1）将石莼利用常规方法浸泡脱盐后干燥并粉碎，向石莼干粉中加入60‑80%v/v乙醇回流提取1‑2小时，干粉重量g与乙醇体积mL比为1:20‑30，回流结束后烘干得到干燥脱脂的石莼粉末，回收乙醇循环使用；（2）向步骤(1)制得的脱脂石莼粉末中加入蒸馏水，其中石莼质量g与蒸馏水体积mL比为1:30‑40，并在60‑70℃的萃取温度下以350‑400W超声波辅助提取120分钟，而后于80‑90℃热水中浸提2‑3小时，提取结束后，进行过滤，将滤渣重复进行2‑3次提取，合并滤液，在4000‑5000rpm离心10‑20分钟，得上清液在65‑70℃下减压浓缩至原体积的1/10，加入浓度为95%v/v乙醇使体系中乙醇浓度达80%v/v，然后在4℃静置8‑12小时，滤取沉淀，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，减压干燥，得石莼粗多糖；（3）取步骤(2)制备得到的石莼粗多糖，完全溶解于蒸馏水中，多糖与蒸馏水的溶解体积比为1:100‑1:120，然后加入0.1%‑0.2%重量的中性蛋白酶，于40℃下静置2‑3小时后，于100℃煮沸20‑30分钟，将溶液于4000‑5000rpm离心10‑15分钟，除去沉淀，得除蛋白的粗制多糖溶液；（4）取步骤(3)所得到的溶液，通过HPD‑826大孔吸附树脂填充柱，洗脱液经过非极性吸附剂活性炭去除色素，活性炭使用量g与洗脱液体积mL按照重量体积比1:35‑50，以60‑80rpm与摇床震荡1‑2小时，而后6000‑8000rpm离心20‑30分钟，收集上清液；（5）利用截留分子量8000‑14000D以上的透析袋，去除步骤(4)所得溶液中的小分子及色素，将截留液进行减压浓缩，浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥，粉碎后得到精制石莼多糖粉末；（6）取步骤(5)所得的精制石莼多糖粉末，完全溶解于蒸馏水中，多糖与蒸馏水的溶解体积比为1:80‑1:100，然后加入溶液重量0.05%的过氧化氢及0.026%的抗坏血酸或异抗坏血酸，于65‑75℃下反应3‑4小时，并辅以100‑200rpm的搅拌，得到石莼多糖降解液；（7）取步骤(6)所得的石莼多糖降解液，加入浓度为95%v/v乙醇使体系中乙醇浓度达75%v/v，然后在4℃静置8‑12小时，将溶液于4000‑5000rpm离心10‑15分钟，除去沉淀，收集上清液，进行减压浓缩，浓缩至原体积的1/5‑1/4，得粗制石莼寡糖溶液；（8）将步骤(7)中粗制石莼寡糖溶液，采用截留分子量2000D透析袋处理，收集透析液；（9）将步骤(8)中透析液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到石莼活性寡糖；（10）将步骤(5)所得石莼多糖粉末及步骤(9)所得石莼寡糖粉末等量混合，即得复方石莼提取物。