[发明专利]一种灵芝多糖、灵芝三萜酸及氨基酸的同步提取纯化方法

摘要

本发明提供了一种灵芝多糖、灵芝三萜酸及氨基酸的同步提取纯化方法，属于天然产物提取技术领域。本发明的方法是以灵芝子实体为起始原料，通过使用碱液低温超声提取，同时使用抗氧剂保护多糖及易氧化成分，提高灵芝多糖及活性成分的提取率，而且采用陶瓷膜微滤技术，大大增加了浓缩效率及粗分效果，同时使用相匹配的离子交换树脂进行纯化、醇沉及超滤技术，使灵芝多糖、灵芝三萜酸及氨基酸含量都得到了提高，本发明方法从灵芝子实体中提取纯化得到灵芝多糖含量在90％以上、灵芝三萜酸含量在92％以上、氨基酸含量在60％以上，更适合于工业生产应用，且简化了提取纯化步骤，降低了成本。

主权项

1.一种灵芝多糖、灵芝三萜酸及氨基酸的同步提取纯化方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将灵芝子实体粉碎后过筛，加入碱液及还原剂于0‑5℃进行超声提取，对提取液离心得离心液和药渣；所述还原剂包括硼氢化钠、亚硫酸氢钠或亚硫酸钠中的一种，还原剂与灵芝子实体的重量比为1:20，所述碱液的浓度为0.3‑1mol/L；(2)将步骤(1)所得离心液调pH值至2‑4，放置8‑16小时，离心，分别收集离心清液和沉淀；(3)氨基酸和灵芝多糖的提取纯化：(a)将步骤(2)中的离心清液通过陶瓷微滤膜过滤，收集过滤液及未透过液；(b)将步骤a中的过滤液通过阳离子交换树脂吸附，依次用纯化水、碱液洗脱，以茚三酮显色反应检测氨基酸，收集碱液洗脱过程中呈阳性反应的洗脱液，洗脱液调pH至4‑7，加热沸腾2小时，冷却，放置8‑16小时，过滤，将滤液减压浓缩，浓缩物真空干燥，打粉混匀，即得棕色粉末氨基酸；(c)将步骤a中的未透过液加入无水乙醇至含醇量为5‑30％，醇沉，离心，收集离心液，再加入无水乙醇至含醇量50‑95％，醇沉，离心，收集沉淀；(d)将步骤c中的沉淀使用有机试剂法除蛋白，减压回收残留有机试剂，浓缩液通过阴离子交换树脂吸附，依次使用纯化水、盐溶液洗脱，以硫酸‑蒽酮法检测多糖，收集呈阳性反应的洗脱液；(e)将步骤d中的洗脱液合并，超滤纯化，收集未透过液，将未透过液进行低温真空干燥，即得类白色海绵状干燥物灵芝多糖；(4)将步骤(2)中的沉淀用碱液溶解，调pH至6‑8，上阴离子交换树脂，使用弱碱乙醇液洗脱，收集醋酐‑浓硫酸显色成阳性的洗脱液，洗脱液调pH至2‑6，减压回收溶剂，真空干燥，呈浅黄色固体，使用乙醇加热溶解，冷却重结晶，得白色针状结晶，真空干燥，即得灵芝总三萜酸。