[发明专利]一种快速无损伤筛选水稻根系构型突变体的方法

摘要

本发明属于水稻育种技术领域，涉及一种快速无损伤筛选水稻根系构型的方法，该方法首先利用甲磺酸乙酯作为诱变剂收获的M2代种子进行实验。本发明在1/2MS培养基平板中观察水稻根系的表型，此方法为无菌操作，避免了细菌一些外界环境因素等的影响。同时，在不损伤根系的情况下对根系的进行扫描和对根系的观察，更加清晰的展现水稻根系的形态。本发明利用新的培养水稻的手段和观察水稻根系的方法，为植物根系研究提供了有效策略。

主权项

1.一种快速无损伤筛选水稻根系构型突变体的方法，其特征在于，包括以下步骤：a.品种的选择：江苏地方栽培品种武运粳7号；b.诱变：将武运粳7号种子浸泡于0.75％的甲基磺酸乙酯，避光浸种16个小时，期间搅拌；c.清洗：将诱变后的粳稻种子用流水冲洗6个小时，然后在清水中浸种48小时，得诱变种子M1。d.将诱变种子进行播种、单棵插秧，种植5000株，三株混收为一个库，收获的种子为M2代种子；e.种子脱壳：在室内利用小型砻谷机将M2代水稻种子脱壳成糙米；f.种子消毒：取每个库的M2代脱壳水稻种子50‑100粒种子放入50mL离心管中，先加入70％的无水乙醇10mL，浸泡2min后将70％无水乙醇倒出。再加入30mL的30％次氯酸钠和5uL的吐温80，浸泡30min，期间每5min反复颠倒50mL离心管一次；g.种子清洗：将上述的50mL离心管在超净台打开，倒掉里面的液体。用灭过菌的去离子水反复清洗5‑6遍；h.种子吹干：将上述50mL离心管里的去离子水倾倒干净，将种子倒入到带有滤纸的圆形玻璃培养皿中，在超净台吹干半个小时；i.将吹干的种子用镊子夹取水稻种子转移到1/2MS培养基的分化罐中，保持胚朝上，胚乳朝下，在温度28℃，湿度60％的气候箱黑暗处理2‑3天等待水稻长出1‑2cm小根；j.将长出1‑2cm小根的水稻幼苗用镊子夹取转移到带有培养基的24×24cm的方形平板中；k.将方形平板放在架子上培养在人工气候箱，光照强度80‑100μmol/m²s^‑1温度28‑30℃，湿度40％‑60％，全光照处理三天，将方形平板放在扫描仪上扫描，观察水稻根系的构型变化；l.根系突变体的鉴定：取获得的根系突变体备选材料100粒左右，继续相同的方法处理，观察与统计其表型是否与上一代一致，将表型一致的初选材料，在下一个年度里种植，继续鉴定是否稳定遗传；并且回交野生型，为后面的遗传研究做好准备；m.根系突变体的确定：综合连续三代后，观察是否表型一致并且稳定遗传；n.遗传稳定性检测：通过M4和M5代的实验测定该突变体的表型是否一致。