[发明专利]检测抗菌粉体材料诱发活性氧在细胞内富集水平的方法

摘要

本发明公开了一种检测抗菌粉体材料诱发活性氧在细胞内富集水平的方法，该方法利用荧光探针DCFH‑DA作为活性氧的高灵敏检测分析物，通过得到的DCF荧光信号值可以准确分析菌体内由抗菌粉体材料诱发产生活性氧的含量；该方法结合生物与化学的检测方法，克服电子自旋共振法，化学发光法等技术的局限，为研究活性氧杀菌的抗菌机理打下了坚实的基础。

主权项

1.一种检测抗菌粉体材料诱发活性氧在细胞内富集水平的方法，其特征在于按以下步骤进行：（1）将细菌菌株接种至液体培养基中，培养至对数生长期形成细菌悬液，细菌悬液的OD₆₀₀值为1；（2）将细菌悬液用液体培养基进行稀释，稀释至CFU为5‑6×10⁸个/mL；（3）在5‑10mL的稀释菌液中加入100‑300μL浓度为 1×10^‑5‑3×10^‑5mol/L的DCFH‑DA 荧光染料液，混匀；该步骤混合液留存一份作为对照样；（4）然后在混合液中加入0.01g‑0.1g抗菌粉体，在37℃下振荡混合20‑30min，离心收集沉淀，用pH7.2‑7.4的PBS 缓冲液清洗2‑3次后，离心沉淀再用PBS 缓冲液制成细菌悬液；（5）用荧光分光光度计检测步骤（4）细菌悬液和对照样的DCF 荧光信号值，所测得的荧光强度值与活性氧水平成正比；由于对照样品没有活性氧存在，通过与对照样品的荧光强度值比较，判断活性氧进入细胞体内的富集水平。