[发明专利]一种基于颗粒细胞基因表达情况评估卵及胚胎质量的方法

摘要

本发明涉及生物技术领域。目的是提供一种评估卵母细胞及胚胎质量的方法，该方法具有准确率高的特点，有利于提高胚胎移植成功率，减少医疗费用。技术方案是：一种基于颗粒细胞基因表达情况评估卵及胚胎质量的方法；按以下步骤依次进行：1)在管性因素有生殖问题的取卵病人取卵日，收集其卵子外围多余的颗粒细胞；2)将收集的颗粒细胞作为样品，使用RNA提取试剂盒获得颗粒细胞样品中的总RNA；3)使用逆转录试剂盒配置混合物后在普通PCR仪中实验获得cDNA模板；4)使用实时定量PCR试剂盒，在步骤3)获得的cDNA模板中分别加入如下序列的ADAMTS1引物、HSPG2引物以及管家基因β‑actin引物。

主权项

1.一种基于颗粒细胞基因表达情况评估卵及胚胎质量的方法；按以下步骤依次进行：1)在管性因素生殖问题的取卵病人取卵日，收集其卵子外围多余的颗粒细胞；2)将收集的颗粒细胞作为样品，使用RNA提取试剂盒获得颗粒细胞样品中的总RNA；3)使用逆转录试剂盒配置混合物后在普通PCR仪中实验获得cDNA模板；4)使用实时定量PCR试剂盒，在步骤3)获得的cDNA模板中分别加入如下序列的ADAMTS1引物、HSPG2引物以及管家基因β‑actin引物：5)采用实时定量PCR仪进行实时定量实验，获得不同样品的ADAMTS1、HSPG2、β‑actin的CT值；6)使用EXCEL根据公式计算每个样品的ADAMTS1及HSPG2的mRNA相对含量，得到每个样品相对β‑actin的mRNA相对含量的计算公式为：ADAMTS1的mRNA相对含量＝2^{β‑actin的CT值‑ADAMTS1的CT值}；HSPG2的mRNA相对含量＝2^{β‑actin的CT值‑HSPG2的CT值}；7)运用EXCEL，将步骤6)获得的数据代入公式P＝1/[e^{2.014‑78.316*HSPG2的相对含量‑1.888*ADAMTS1的相对含量}]，计算预测概率值P，若预测概率值大于等于0.438时可判为阳性，即则判断该病人胚胎移植后可成功着床。