[发明专利]一种肥胖基因突变的诊断试剂盒及应用

摘要

本发明提供一种肥胖基因突变的诊断试剂盒，针对肥胖相关致病基因编码序列，由5’往3’方向，按照序列反向互补原则设计探针序列，在每个探针序列的连接接头，采用寡核苷酸原位合成技术，在芯片上进行寡核苷酸大规模合成，用氨水将芯片上的寡核苷酸洗脱形成寡核苷酸混合物，通过PCR的方法，采用5’端带有生物素标记的引物，形成带生物素标记的肥胖相关致病基因DNA探针文库。本发明实现对肥胖相关的已知位点的高通量筛查方法及应用，比单独进行位点筛查和全基因组或者全外显子测序的检测更快速、更经济和简便，且对设备及环境要求低，可在与肥胖相关的已知核基因的多态性位点中的应用，适用于肥胖相关人群的大规模筛查和预防性检查。

主权项

1.一种肥胖基因突变的诊断试剂盒，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)针对所述基因的编码序列，由5’往3’方向，按照序列反向互补的原则，从第一个碱基开始设计长度为100bp的探针序列，并且每两个相邻的探针序列之间存在重叠，所述每两个相邻的探针序列之间重叠是所述探针长度的1/2或2/3，共计535个基因；(2)在每个探针序列的5’端和3’端，分别添加SEQ:NO.1和SEQ:NO.2序列，形成两端带有接头序列；(3)采用寡核苷酸原位合成技术，在芯片上进行寡核苷酸的大规模合成上述探针序列，将芯片上的寡核苷酸洗脱下来，形成寡核苷酸混合物；(4)通过PCR的方法，采用5’端均带有生物素标记的正向引物TTAGATAGGTGTGTAGGCGC和反向引物TAAGGTGCGTACTAGCTGAC，对寡核苷酸混合物进行扩增，形成带生物素标记的基因DNA探针文库。其中PCR条件：热盖105℃，95℃5min，65℃延伸保存。