[发明专利]一种快速建立轮虫单个体无性繁殖种群的方法

摘要

一种快速建立轮虫单个体无性繁殖种群的方法，该方法包括一种培养容器、一种混合培养液的配置方法以及一种逐步过渡培养方法。具体的，本发明设计了一种碗状玻璃器皿，该玻璃器皿具有开口宽大、碗身矮小、底部与器皿壁连接处存在弧度和玻璃透光率高的特点，可以方便的在体视显微镜下对轮虫进行观察、培养、计数和更换培养液等操作；本发明还提供了一种使用过滤湖水和EPA培养液的混合溶液作为初始培养基，并建立了逐步过渡到使用EPA培养液来培养的方法，使轮虫逐步适应新培养液，以期达到轮虫单个体无性繁殖快速建立种群的目的。相较于纯培养液体系，采用本发明方法培养的轮虫存活率高、繁殖快，缩短了使用单个体轮虫建立种群的时间。

主权项

1.一种快速建立轮虫单个体无性繁殖种群的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1,在野外河流、湖泊使用浮游生物网在水面进行反复拖捞，采集浮游动物，保存在500mL塑料瓶中；同时收集3L干净湖水，带回实验室备用；S2,使用0.22μm孔径的膜对湖水进行过滤，去除浮游动物、杂质和微生物，与EPA培养液按照8:2的比例混合；在每个培养容器中加入1.5‑2ml混合液，备用；所述培养容器为碗状玻璃器皿，碗状玻璃器皿的开口直径d1＝25‑35mm，底部直径d2＝14‑20mm，总高度H1＝15‑25mm，碗状玻璃器皿的上半部分为圆柱体，下半部分的内外表面均呈现圆弧状并与底部进行圆滑过渡，透光率大于98％；S3,摇匀收集到的浮游动物，倒少量液体于培养皿中；在体势显微镜下进行甄别筛选，并用吸管吸取培养皿中的轮虫，转移至所述培养容器中，每个培养容器中放一只轮虫；S4,向每个培养容器中投喂0.5×10⁶cells/mL密度的斜生栅藻，放入光照培养箱进行培养，培养条件为：明暗比12h:12h，光照强度2000Lux，温度25±1℃；S5,使用逐步过渡培养方式，步骤4即培养第1天使用8:2比例的湖水/EPA培养液混合液作为初始培养液，第2天替换为6:4比例的湖水/EPA培养液混合液作为混合培养液，第3天使用4:6比例的湖水/EPA培养液混合液作为混合培养液，第4天使用2:8比例的湖水/EPA培养液混合液作为混合培养液；从第5天开始，使用纯EPA培养液作为最终培养液；S6,根据轮虫的繁殖数量，不断增大培养体积；并根据轮虫的种群密度，适量增加投喂藻类食物的密度；当轮虫总数达到100个时，视为种群建立成功，可转移至更大的容器中进行大规模培养。