[发明专利]携带FGF-1基因慢病毒表达质粒的构建方法在审
| 申请号： | 201910082476.7 | 申请日： | 2019-01-28 |
| 公开（公告）号： | CN109609555A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 郭建军;田莹;檀军;赵帅;郑玉林;陈緖美;尹志勇 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/12 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 李亮;程新敏 |
| 地址： | 550025 贵州省贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明公开一种携带FGF‑1基因慢病毒表达质粒的构建方法。在pLenti‑Mcherry‑Puro载体的Not I和Avr II多克隆位点处插入FGF‑1基因，用构建好的pLenti‑FGF‑1‑Emcherry‑Puro重组质粒转染MDA‑MB‑453细胞，通过嘌呤霉素筛选及鉴定，得稳定转染FGF‑1基因的细胞株。该重组质粒含红色荧光蛋白mcherry，便于在荧光显微镜下观察阳性细胞；该重组质粒带有嘌呤霉素抗性基因、氨苄西林抗性基因标签，可在原核表达时或真核表达时加入氨苄西林或嘌呤霉素进行筛选。该质粒为进一步深入研究FGF‑1基因的生物学特性、功能及为研发抗肿瘤药物奠定了坚实基础。 | ||
| 搜索关键词： | 基因 构建 慢病毒表达质粒 氨苄西林 重组质粒 嘌呤霉素 嘌呤霉素抗性基因 红色荧光蛋白 重组质粒转染 筛选 多克隆位点 抗肿瘤药物 生物学特性 荧光显微镜 坚实基础 抗性基因 阳性细胞 原核表达 真核表达 携带 细胞株 研发 质粒 转染 标签 细胞 观察 研究 | ||
【主权项】：
1.一种携带FGF‑1基因慢病毒表达质粒的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：1)FGF‑1基因的扩增；2)将FGF‑1基因与载体pLenti‑Mcherry‑Puro连接，构建重组慢病毒表达质粒pLenti‑CMV‑FGF‑1‑Emcherry‑Puro；3)将重组慢病毒表达质粒pLenti‑CMV‑FGF‑1‑Emcherry‑Puro与慢病毒包装质粒psPAX2及pVSV‑G共转染293T细胞，48h后，收集上清，72000×g离心4h获得高度浓缩的慢病毒颗粒；4)将包装好的重组慢病毒CMV‑mcherry‑LVP转染293T细胞，通过嘌呤霉素筛选阳性细胞株，对阳性细胞株进行细胞免疫荧光鉴定，获得稳定表达FGF‑1蛋白细胞株。
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