[发明专利]一种抗氧化融合蛋白的生产方法在审
| 申请号： | 201910027485.6 | 申请日： | 2019-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN109609532A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 王学庆;李鹏云;王楠 | 申请（专利权）人： | 许昌佰柯蛋白与基因工程研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/62 | 分类号： | C12N15/62;C12N15/70;C12N9/02;C07K14/825;C07K19/00 |
| 代理公司： | 北京高沃律师事务所 11569 | 代理人： | 代芳 |
| 地址： | 461000 河南省许昌市*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种抗氧化融合蛋白的生产方法，属于抗氧化技术领域，包括将抗氧化融合基因转入大肠杆菌，再接种、培养、诱导后，将离心得到的菌体用缓冲液重悬后与T4溶菌酶混合、温育，将得到的温育物与Tween 20混合后进行水浴，水浴的温度为60～70℃，水浴的时间为0.5～1.5h，将得到的水浴物离心，得到抗氧化融合蛋白；采用本发明提供的方法既可以裂解大部分菌体，又能够保证抗氧化融合蛋白的活性，还能够使得其它蛋白变性，适合大规模生产。 | ||
| 搜索关键词： | 抗氧化 融合蛋白 水浴 温育 大肠杆菌 蛋白变性 缓冲液重 融合基因 菌体 裂解 接种 诱导 转入 生产 保证 | ||
【主权项】：
1.一种抗氧化融合蛋白的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将抗氧化融合基因与载体连接后转入大肠杆菌，得到含有抗氧化融合基因的大肠杆菌；所述抗氧化融合基因是将MT基因和SOD基因连接后得到；所述MT基因具有SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；所述SOD基因具有SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；2)将所述步骤1)得到的含有抗氧化融合基因的大肠杆菌接种于含有氨苄和氯霉素的LB液体培养基中进行第一培养，得到第一培养物；所述第一培养的时间为12～16h；3)将所述步骤2)得到的第一培养物接种于含有氨苄和氯霉素的TB液体培养基中进行第二培养，得到第二培养物；所述第二培养的时间为3.5～4.5h；4)将所述步骤3)得到的第二培养物与异丙基硫代半乳糖苷、氯化锌混合后进行诱导培养，得到诱导物；5)将所述步骤4)得到的诱导物进行离心，将得到的菌体用缓冲液重悬后与T4溶菌酶混合、温育，将得到的温育物与Tween 20混合后进行水浴，将得到的水浴物离心，得到抗氧化融合蛋白；所述水浴的温度为60～70℃；所述水浴的时间为0.5～1.5h。
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