[发明专利]一种囊胚中单个卵裂球的分离方法在审
| 申请号： | 201910014453.2 | 申请日： | 2019-01-07 |
| 公开（公告）号： | CN109609445A | 公开（公告）日： | 2019-04-12 |
| 发明（设计）人： | 曹祖兵;宁伟;程竹兵;刘洪瑜;王恒;刘传江;高迪;许腾腾;张运海 | 申请（专利权）人： | 安徽农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 沈尚林 |
| 地址： | 230000 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种囊胚中单个卵裂球的分离方法，包括如下步骤：口吸针的制备；分离针的制备；链霉蛋白酶和胰蛋白酶的准备；囊胚透明带的去除；囊胚单个卵裂球的分离收缩后的囊胚置于50μL的胰蛋白酶液滴中温育40min，温育后，先用细口口吸针将囊胚移入1g/L的BSA液滴中洗净后，用细口口吸针快速吹吸将囊胚吹散开，直到有一些细胞团无法通过吹吸进行分离，再用分离针的细段部分将细胞团中的单个细胞分开即可，本发明采用胰蛋白酶分离囊胚单卵裂球，细胞形态完整，细胞之间间隔分明，发明所需试剂耗材容易获得，经济，发明步骤简单易行，是一种可广泛推广的简单经济有效的实用方法。 | ||
| 搜索关键词： | 囊胚 单个卵 口吸 分离针 细胞团 细口 制备 胰蛋白酶 胰蛋白酶分离 链霉蛋白酶 胰蛋白酶液 单个细胞 单卵裂球 简单经济 细胞形态 散开 透明带 耗材 去除 温育 洗净 细段 液滴 移入 中温 收缩 细胞 | ||
【主权项】：
1.一种囊胚中单个卵裂球的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)口吸针的制备；(2)分离针的制备；(3)链霉蛋白酶和胰蛋白酶的准备链霉蛋白酶：向离心管中加入30μL的10g/L链霉蛋白酶，再加入60μL1g/L的BSA滴液，吸打混匀后进行瞬离，瞬离结束后置于预热；胰蛋白酶：将2.5g/L的胰蛋白酶预热10‑15min，再移取50‑100μL 2.5g/L的胰蛋白酶于进口皿中，每个进口皿中含有两个50‑100μL胰蛋白酶液滴，并用石蜡油覆盖，预热；(4)囊胚透明带的去除取一形态较好的扩张囊胚，用移卵针移入50‑60μL链霉蛋白酶液滴中，待透明带即将被消化完全时，将囊胚依次置于三个50‑100μL 1g/L的BSA液滴中洗净，洗净后用一根直径小于囊胚直径的口吸针轻柔吸吐囊胚使其收缩；(5)囊胚单个卵裂球的分离收缩后的囊胚置于50‑100μL的胰蛋白酶液滴中温育40‑45min，温育后，先用细口口吸针将囊胚移入1g/L的BSA液滴中洗净后，用细口口吸针快速吹吸将囊胚吹散开，直到有一些细胞团无法通过吹吸进行分离，再用分离针的细段部分将细胞团中的单个细胞分开即可。
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