[发明专利]一种高表达SOD3的CHO细胞株构建方法及SOD3蛋白纯化方法有效
| 申请号： | 201811638520.X | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109486771B | 公开（公告）日： | 2021-02-12 |
| 发明（设计）人： | 王冰;张伟涛;王康;沈洁;沈艳 | 申请（专利权）人： | 深圳市旷逸生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/53;C12N15/867 |
| 代理公司： | 深圳市金信启明知识产权代理有限公司 44484 | 代理人： | 邹蓝 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市前海深港合作区前*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高表达SOD3的CHO细胞株构建方法及SOD3蛋白纯化方法，所述构建方法如下：一、构建表达SOD3基因的慢病毒载体质粒；二、将慢病毒载体质粒和包装质粒psPAX2、pMD2.0G共转染293T细胞，包装成携带SOD3编码基因的慢病毒；三、将携带SOD3编码基因的慢病毒感染CHO细胞，并经过嘌呤霉素筛选后得到表达SOD3蛋白的CHO细胞群后，再用有限稀释法、Western blot方法进一步将上述嘌呤霉素筛选后的表达SOD3蛋白的CHO细胞进行筛选得到稳定的SOD3+CHO细胞株，将其进行发酵培养、蛋白分离纯化，可得到SOD3。本发明可以大规模生产具有生物活性的SOD3蛋白。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表达 sod3 cho 细胞株 构建 方法 蛋白 纯化 | ||
【主权项】：
1.一种高表达SOD3的CHO细胞株构建方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：一、将SOD3的核苷酸序列连接到PUC57克隆载体上构建表达SOD3基因的慢病毒载体质粒pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑SOD3‑Puro；二、将慢病毒载体质粒pCDH‑CMV‑MCS‑EF1‑SOD3‑Puro和包装质粒psPAX2、pMD2.0G共转染共转染293T细胞，包装成携带SOD3编码基因的慢病毒；三、将携带SOD3编码基因的慢病毒感染CHO细胞，并经过嘌呤霉素筛选后得到表达SOD3蛋白的CHO细胞群后，再用有限稀释法进一步将上述嘌呤霉素筛选后的表达SOD3蛋白的CHO细胞进行筛选得到稳定的SOD3+CHO细胞株。
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