[发明专利]一种磁性固定化脂肪酶及其在制备(R)-(+)-N-乙酰基-甲基苄胺中的应用

摘要

本发明公开了一种磁性固定化脂肪酶及其在制备(R)‑(+)‑N‑乙酰基‑甲基苄胺中的应用，所述的应用为：以磁性固定化脂肪酶为催化剂，以苯乙胺溶液为底物，在25‑50℃、50‑250rpm条件下进行拆分反应，反应结束后，将反应液离心，沉淀回收利用，上清液分离纯化，获得(R)‑(+)‑N‑乙酰基‑甲基苄胺；本发明采用磁性固定化脂肪酶在无溶剂体系中拆分外消旋苯乙胺制备(R)‑(+)‑N‑乙酰基‑甲基苄胺，有利于提高转化效率，磁性固定化脂肪酶可以重复利用多次，有利于提高生产效率。

主权项

1.一种磁性固定化脂肪酶，其特征在于所述磁性固定化酶按如下方法制备：(1)将壳聚糖溶液、硫酸铁溶液、三氯化铁溶液和去离子水以体积比1:0.4:0.4:1.5混合，30‑40℃搅拌均匀，滴加氨水至溶液pH值至10；升温至60℃反应1h；再升温至80℃熟化1h；反应结束，过滤，将沉淀水洗至中性，60℃真空干燥，获得磁性壳聚糖；所述壳聚糖溶液是将壳聚糖溶于体积浓度2％乙酸水溶液制成20g/L的壳聚糖溶液；所述硫酸铁溶液是将FeSO₄·7H₂O溶于去离子水制成150g/L的溶液；所述三氯化铁溶液是将FeCl₃·6H₂O溶于去离子水制成250g/L的溶液；(2)将磁性壳聚糖加入戊二醛溶液中，30℃振荡反应完全，利用磁分离获得沉淀，水洗，60℃真空干燥，获得活化后的磁性壳聚糖；所述戊二醛溶液是由戊二醛溶于0.1M，pH8.5磷酸缓冲液制成体积浓度0.75％的溶液，所述戊二醛溶液体积用量以磁性壳聚糖重量计为0.1ml/mg；(3)将活化后的磁性壳聚糖与脂肪酶溶液混合，于35℃摇床中振荡3h，离心，取沉淀用0.1M，pH8.5磷酸缓冲液小心洗涤数次，直至洗去未结合的脂肪酶，‑80℃冷冻8h，再于冻干机中冻干，得到磁性固定化脂肪酶；所述脂肪酶溶液是由脂肪酶溶于0.1M，pH8.5磷酸缓冲液制成2.4mg/mL的溶液；所述脂肪酶与活化后的磁性壳聚糖重量比为12mg：50g。