[发明专利]一种血中N-甲基氨甲酰加合物的快速检测方法

摘要

本发明公开了一种血中N‑甲基氨甲酰加合物的快速检测方法，该方法包括以下步骤：样品的固相萃取处理；液相色谱‑串联质谱的建立；标准曲线的建立；样品测定。样品经固相萃取处理、高效液相色谱‑串联质谱技术分析，并采用内标法，在电喷雾离子源电离和多反应监测模式条件下进行测定。本发明的快速检测方法，具有快速、准确、灵敏、少污染、低成本的优点，适用于大量样品的准确快速检测。

主权项

1.一种血中N‑甲基氨甲酰加合物的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.样品的处理S11.用肝素抗凝的采血管收集血样1‑10 mL，离心弃去血浆，裂解红细胞，再加入丙酮溶液（含有2%的浓盐酸），沉降离心弃上清液，清洗并干燥，得到血红蛋白；S12.准确称取0.01‑0.2g的血红蛋白置于离心管中，加入3‑甲基‑异丁基海因内标溶液，再加入盐酸‑醋酸(2:1，V/V)溶液后进行降解，将降解后的溶液进行净化处理得到待测样液，再将待测样液转移到样品瓶中待测；S13.向另一离心管加入3‑甲基‑异丁基海因内标溶液，再加入盐酸‑醋酸(2:1，V/V)溶液后进行降解，将降解后的溶液进行净化处理得到空白样液，再将空白样液转移到样品瓶中待测 ；S2液相色谱‑串联质谱的建立色谱条件：色谱柱：C18色谱柱；质谱条件：电离方式：电喷雾离子源（ESI+）；多反应监测模式：3‑甲基‑异丙基乙内酸脲监测72.0/157.1(定量)，129.1/157.1；3‑甲基‑异丁基海因监测86.0/171.1；S3.标准曲线的建立将3‑甲基‑异丙基乙内酸脲标准系列工作液和内标物3‑甲基‑异丁基海因进行测定，以3‑甲基‑异丙基乙内酸脲与内标3‑甲基‑异丁基海因的峰面积比值为纵坐标，以3‑甲基‑异丙基乙内酸脲标准系列工作液浓度为横坐标绘制标准曲线；S4.样品测定将所述待测样液和所述空白样液依次测定进样，得到待测物与内标物的峰面积比值，根据标准曲线得到测定液中3‑甲基‑异丙基乙内酸脲的浓度，并得到样品中N‑甲基氨甲酰加合物的浓度。