[发明专利]一种桑白皮药材UPLC指纹图谱的构建方法及其应用

摘要

本发明公开了一种桑白皮药材UPLC指纹图谱的构建方法及其应用，包括步骤：对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、超高相液相色谱测定、指纹图谱的建立、相似度评价和聚类分析。本发明建立了23 min内快速鉴别桑白皮药材的UPLC指纹图谱方法，并对数据进行相似度评价和聚类分析，该方法简单、高效，重复性好，为全面、有效控制和科学评价桑白皮药材的质量提供了依据。

主权项

1.一种桑白皮药材UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：（a）对照品溶液的制备：精密称取桑皮苷A对照品2.459 mg，置10 ml量瓶中，加70%乙醇制成每1 ml含桑皮苷A 245.9μg的对照品溶液；（b）供试品溶液的制备：取桑白皮药材粉末0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60‑80%乙醇20‑30ml，称定重量，水浴加热回流15‑30 分钟，放冷，用50‑80%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；（c）超高相液相色谱测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各0.5µl，注入超高效液相色谱仪，测定，记录色谱图，其中色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸为流动相B进行梯度洗脱：0~2min，5% A；2~7min，5%→10% A；7~10min，10%→25% A；10~13min，25%→50% A；13~19min，50%→80% A；19~23min，80% A；检测波长：320 nm；流速：0.38 ml/min；柱温：30℃；进样量：0.5μl；（d）指纹图谱的建立：将多批桑白皮药材的色谱图，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行共有峰标识，建立桑白皮药材的对照指纹图谱，确定具有14个共有峰，以峰1 桑皮苷A 的色谱峰为参照峰S峰，各特征峰的相对保留时间分别为：峰1：1.00、峰2：1.07、峰3：1.21、峰4：1.27、峰5：1.30、峰6：1.37、峰7：1.44、峰8：1.49、峰9：1.63、峰10：1.95、峰11：1.99、峰12：2.14、峰13：2.30、峰14：2.37，相对保留时间在规定值的±10%之内； （e）相似度评价：比较不同产地各批次桑白皮药材的色谱图与对照指纹图谱的相似度； （f）聚类分析：运用SPSS19.0软件对不同产地的桑白皮药材进行系统聚类，采用组间平均数联结法，以夹角余弦作为样品相似度的距离公式，得到不同产地的桑白皮药材的聚类结果。