[发明专利]一种连续流层析上样量的确定方法及其应用

摘要

本发明涉及抗体纯化技术领域，尤其是涉及一种连续流层析上样量的确定方法及应用。连续流层析上样量的确定方法，包括如下步骤：将目标蛋白纯品制成上样液，上样获取穿透曲线；按照公式计算蛋白穿透量获取穿透曲线中C/C₀＝a的数据点对应的DBC为穿透载量b；获取蛋白穿透量P_n＝100b±10或P_n＝200b±10时的数据点对应的X，上样量为γ(X‑b)或γ(X‑2b)；其中，a≤5％，0.8≤γ≤1。本发明能够准确给出不同条件下的上样量，以兼顾收率和填料载量，可用于各类蛋白的分离纯化等，确定方法简单，无需积分处理等软件，具有便利性、操作学和易学性。

主权项

1.一种连续流层析上样量的确定方法，其特征在于，包括如下步骤：将目标蛋白纯品制成上样液，上样获取穿透曲线，穿透曲线的X轴为动态结合载量，Y轴为C/C₀；其中，C₀为上样液的紫外吸收值，C为流出液的紫外吸收值；按照公式计算蛋白穿透量S_i＝(X_i‑X_i‑1)·(Y_i+Y_i‑1)/2；其中X_i和X_i‑1分别为穿透曲线中相邻数据点对应的动态结合载量，Y_i和Y_i‑1分别为穿透曲线中相邻数据点对应的C/C₀，n为正整数；获取穿透曲线中C/C₀＝a的数据点对应的动态结合载量为穿透载量b；获取蛋白穿透量P_n＝100b±10或P_n＝200b±10时的数据点对应的X，上样量为γ(X‑b)或γ(X‑2b)；其中，a≤5％，0.8≤γ≤1；所述连续流层析的方式选自一柱拖一柱、一柱拖二柱、二柱拖二柱的上样方式；当连续流层析的方式为一柱拖一柱串联方式时，蛋白穿透量P_n＝100b±10时的数据点对应的X，上样量为γ(X‑b)；当连续流层析的方式为一柱拖二柱串联方式时，蛋白穿透量P_n＝200b±10时的数据点对应的X，上样量为γ(X‑2b)；当连续流层析的方式为二柱拖二柱串联方式时，蛋白穿透量P_n＝100b±10时的数据点对应的X，上样量为γ(X‑b)；其中γ作为安全系数，避免实际操作造成的流穿，导致样品的流失。