[发明专利]一种鸡胚提取物及其制备与应用

摘要

本发明涉及一种鸡胚提取物及其制备方法，以及该鸡胚提取物在动物细胞体外培养中的应用。本发明采用超声破碎鸡胚浸出液中组织和细胞内的营养成分，再加上液氮的反复冻融，其营养物质的质和量显著高于现有的鸡胚提取物。本发明经过研磨、超声破碎和冻融的鸡胚提取物内含有大量的细胞生长因子、大分子蛋白及一些小分子氨基酸等，有促进细胞生长的作用，可用于动物细胞尤其是家禽细胞的体外培养，所培养的细胞形态饱满，繁殖活力强。

主权项

1.一种鸡胚提取物，由如下方法制备获得：(1)种蛋孵化：选取鸡新鲜种蛋，于恒温孵化箱内进行孵化；(2)蛋壳消毒：孵育至10日龄取出种蛋，消毒蛋壳表面，气室端向上置于消毒过的蛋托上；(3)取鸡胚：去除气室端蛋壳，拨开尿囊膜，用镊子夹取鸡胚置于平皿中；(4)鸡胚处理：去除胚眼、喙、气囊、膜囊、尿囊膜，用无菌PBS充分冲洗鸡胚；(5)鸡胚研磨：将处理好的鸡胚置于无菌玻璃皿中充分剪碎后置于离心管中，用全自动冷冻组织研磨仪充分研磨至匀浆状；(6)浸出：在离心管中加入等量Hanks液，吹打均匀，封口膜密封后置于37℃恒温培养箱中1小时；(7)超声破碎：将密封的离心管取出后，进行超声破碎；(8)反复冻融：将离心管投入液氮中彻底冷冻后取出，室温放置至彻底溶解，如此反复冻融3次；(9)离心：离心，吸取上清液，收集于小瓶中；(10)过滤：将收集的上清液依次用0.44μm和0.22μm滤膜过滤后，即得所述鸡胚提取物，置于‑80℃冰箱中保存备用。