[发明专利]一种虫草发酵液配置方法

摘要

本发明公开了一种虫草发酵液配置方法，包括如下步骤：S1、冬虫夏草真菌分离：采用组织分离法可以获得植物内生菌做为人工冬虫夏草的生产菌株。与现有技术相比具备以下优点：采用深层发酵生产虫草菌丝体，一方面很容易从培养液中分离和提取出各种有效成份物质，提取虫草酸、虫草素、虫草多糖等有用物质和具有抗癌作用的冬虫夏草素及多种氨基酸，大批量生产虫草菌丝体：另一方面利用1t‑10t甚至更大容积的发酵罐内培养，能够提高产量，保证筛选用药的物质来源，缓解虫草资源的紧张状况，鉴于液体发酵具有周期短，原料及培养条件易得，造价低，收率高和较稳定等特点，对虫草菌丝体的人工发酵培养应该是主要发展方向。

主权项

1.一种虫草发酵液配置方法，其特征在于：包括如下步骤：S1、冬虫夏草真菌分离：采用组织分离法可以获得植物内生菌做为人工冬虫夏草的生产菌株，即采用直接切取虫草的子座部分或菌核部分的一小块组织，经表面消毒和灭菌水洗后，在无菌操作条件下，由虫草体上转移到培养基上，切取组织1mm左右，组织切取过大会增加染菌的机会，组织切取过小，一方面在表面消毒过程中易将该组织杀死，另一方面也相应地延长了虫草菌种的生长时间，取春夏之交的新鲜冬虫夏草的子座，用0.1L汞液表面消毒5min，再用无菌水反复冲洗，在无菌条件下切去外层、避开肠边，切取内部白色组织1cm㎡左右，压碎涂于培养基表面，20℃温箱4个月，得到母种；S2、斜面培养：以蔗糖2％，工业蛋白胨0.15％，酵母粉1％，MeSO，0.05％，KHEPO，0.1％为培养基(oH6～7)，于121℃灭菌30min，接种于固体培养基上于27士1℃，培养4～5d，菌丝均匀长满斜面后，置冰箱4℃保存备用；S3、摇瓶培养：以蔗糖2％，工业蛋白胨0.15％，酵母粉1％，MgS0。0.05％，KHP0。0.1％为培养基(pH6～7)，采用250m1l三角瓶装培养基50m1，采用27±1C，摇床转速230r/min,振荡培养；S4、摇瓶种子培养：以蔗糖2％，工业蛋白胨0.15％，酵母粉1％，MeSO。0.05％，KHLPO:0.1％为培养基(DH6‑7)，采用500ml三角瓶，装培养基120ml，采用27+1℃，摇床转速230r/min，振荡培养48～60h，镜检菌丝粗壮，无杂菌后，合并作为进罐种子；S5、种子罐培养：葡萄糖25kg/nm2，豆粕20kg/m2，豆油0.6kg/m，硫酸镁0.6kg/m，磷酸二氢钾0.1kg/m2，蛋白胨3kg/m’为发酵液(DH6～7)，采用1m°种子罐，装料系数为0.8，在27士1C温度下发酵培养；S6、发酵罐培养：葡萄糖100kg/m2，豆粕25kg/m3，豆油0.9kg/m，硫酸镁0.9kg/m，磷酸二氢钾0.2kg/m2，蛋白胨6kg/m，消泡剂0.6kg/m3为培养基(DH6～7)，采用10m°发酵罐，装料系数为0.8，在27±1℃温度下培养。