[发明专利]山草果的组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种山草果的组织培养快速繁殖方法，具体按照以下步骤进行：步骤一、外植体的选择；步骤二、外植体灭菌；步骤三、愈伤组织诱导培养；步骤四、不定芽诱导分化培养；步骤五、增殖培养；步骤六、生根培养；步骤七、驯化和炼苗。本发明能使种苗性状更稳定，适宜标准化、规模化生产、更易产生壮苗，为市场提供标准统一的优质、优良种苗。

主权项

1.山草果的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，具体按照以下步骤进行：步骤一、外植体的选择：每年4‑5月，选取生长健壮、无病虫害山果草植株嫩叶；步骤二、外植体灭菌：外植体在自来水下冲冼干净，用质量分数为0.02％的高锰酸钾溶液浸泡10分钟，再用自来水冲洗干净，然后在无菌工作台内用质量分数为0.1％的升汞溶液灭菌5分钟，用无菌水冲洗5‑6次，最后用无菌滤纸吸去外植体表面水分；将无菌叶片切割为1cm2小块；步骤三、愈伤组织诱导培养：将步骤二得到的1cm2小块的无菌叶片，接种到培养基中，培养基为MS培养基+6‑BA 0.2‑0.5mg/L+2.4D 0.2mg/L/NAA0.1‑0.2mg/L+糖30g/L+琼脂5g/L，愈伤组织诱导培养基pH值为6.0，叶片叶面接触培养基，在叶脉处划伤叶脉，在温度为23‑25℃，光照强度为1800‑2000LX，光照时间为每天10小时的条件下培养25‑30天，得到愈伤组织；步骤四、不定芽诱导分化培养：将步骤三得到的愈伤组织切割成小块，接种到培养基中，培养基为MS培养基+6‑BA 0.2‑1mg/L+NAA 0.1‑0.2mg/L+糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为5.8‑6.2；在温度23‑25℃，光照强度为1800‑2000LX，光照时间为每天10小时的条件下，培养20‑25天得到不定芽丛；步骤五、增殖培养：将步骤四得到的芽丛切割成1‑2个小芽的芽丛或含1‑2个茎节的小段，接种到培养基中，培养基为MS培养基+6‑BA 0.2‑0.8mg/L+丝氨酸0‑0.4mg/L+NAA0.1‑0.2mg/L+糖30g/L+琼脂5g/L，pH值为5.8‑6.2；在温度23‑25℃，光照强度为2000‑2500LX，光照时间为每天12小时的条件下，培养15‑20天，得到不定芽丛；步骤六、生根培养：将步骤五得到的不定芽丛，从叶痕下0.5cm的地方切段并带少量愈伤组织的小苗，接种到MS培养基+IBA 0.6mg/L+NAA 0.3mg/L+糖30g/L+琼脂5g/L，pH值6.2的培养基中，在温度23‑25℃，光照强度为2000‑2500LX，光照时间为每天10小时的条件下，培养30‑40天，得到生根苗；步骤七、驯化和炼苗：将步骤六得到的小苗，用清水洗净生根苗基部的培养基，然后定植到基质中，浇足定根水，保持湿度为70‑80％，遮光率为40％，7天后增加光照，中午12时以前拉开遮阳网，中午12时后关闭遮阳网，湿度控制在50‑60％，15‑20天后，按照自然条件管理，除冬季，其他季节都能够驯化炼苗，经30‑40天的驯化炼苗。