[发明专利]一种三棱再生体系的构建方法

摘要

本发明公开了一种三棱再生体系构建的方法，三棱为黑三棱科植物的干燥块茎，主产河北、辽宁、江苏、江西等地。秋、冬两季采挖其块茎，除去须根、茎叶，洗净泥土，削去外皮晒干。气微，味淡，嚼之有麻辣感。具有行血、行气、消积、止痛作用。用于瘀血所致之闭经，痛经，腹痛。三棱的组织培养快速繁殖方法，以三棱为最初外植体，通过无菌体系建立、初代培养、丛生芽增殖培养、丛生芽壮苗培养、试管苗生根以及试管苗驯化移栽等过程建立了三棱的再生体系，为三棱优质种源的快速繁殖提供生产方法。

主权项

1.一种三棱再生体系构建的方法，其特征在于包括以下工艺步骤： 步骤1,无菌体系建立：选取成熟饱满、完整无病虫害的三棱种子，在自来水下初步清洗干净,种子以0.1%～0.5%高锰酸钾溶液浸泡5h，直至高锰酸钾溶液的颜色变浅至粉红色，经自来水冲洗干净后在75%乙醇溶液中消毒5min，无菌水冲洗5次，无菌滤纸沥干，人工去外种皮，接种到萌发培养基上进行启动培养；萌发培养基为：3/4B5 + 0.8mg/L 6‑BA+0.3mg/L NAA +1.8%蔗糖+3.5%琼脂+0.05%活性炭，pH值为5.6;步骤2,初代培养：将无菌体系培养的萌发子叶未脱落的无菌苗接种到初代培养基上进行培养，接种后先在24℃条件下全暗培养15天，然后置于每天光照16小时，光照强度为2600lx，培养温度为24℃的条件下培养，41天转接一次；初代培养基为：B5+1～4mg/L 6‑BA+1～1.5mg/L 2,4‑D+1.5%蔗糖+0.3%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.6;步骤3,丛生芽增殖培养：将初代培养的无菌苗无顶芽长度为4cm的茎段接种到增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在24℃条件下全暗培养15天，然后置于每天光照16小时，光照强度为2600lx，培养温度为24℃的条件下培养，41天转接一次；增殖培养基为：MS+1～2mg/L KT+1～1mg/L NAA+4mg/L 6‑BA+1.5%蔗糖+0.3%琼脂+0.1%活性炭，pH值为5.6;步骤4,丛生芽壮苗培养：将丛生芽增殖得到的不定芽，切除基部少量愈伤组织，去除底部叶片后接种到壮苗培养基上进行壮苗培养，接种后先在24℃条件下全暗培养15天，然后置于每天光照16小时，光照强度为2600lx，培养温度为24℃的条件下培养，41天转接一次；壮苗培养基为MS+0.8mg/L NAA+1.3mg/L 6‑BA+1.8%蔗糖+0.6%琼脂+0.11%活性炭，pH值为5.6;步骤5,试管苗生根：将长至4cm的,叶片数不少于5片，植株较健壮的无根苗分切接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在24℃条件下全暗培养15天，然后置于每天光照16小时，光照强度为2600lx，培养温度为24℃的条件下培养至生根；生根培养基为1/2MS+0.8mg/L NAA+3.8%蔗糖+0.8%琼脂+0.13%活性炭，pH值为5.6；步骤6,试管苗驯化移栽：将长至8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗18天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由黄沙土和火碳泥=2：1混合成的基质中并定植于大田中。