[发明专利]一种多环芳烃对呼吸系统的影响检测方法

摘要

本发明公开的属于污染检测技术领域，具体为一种多环芳烃对呼吸系统的影响检测方法，该多环芳烃对呼吸系统的影响检测方法包括如下步骤：S1：样品采集；S2：样品处理：将样品剪成等面积的碎片，置于锥形瓶中，用正己烷和乙醚进行超声波抽取1‑3次，每次抽取时间为15‑25分钟，合并提取液，过滤，然后浓缩，分离出多环芳烃；S3：滴注；S4：检测，该发明提出的一种多环芳烃对呼吸系统的影响检测方法，能够准确的判断出不同粒径的多环芳烃在人体呼吸系统上的沉积量，从而便于对多环芳烃排放的管理，除了控制多环芳烃总排放量外，还需要控制不同粒径的多环芳烃的排放，该发明便于操作，为污染管理具有重要意义。

主权项

1.一种多环芳烃对呼吸系统的影响检测方法，其特征在于：该多环芳烃对呼吸系统的影响检测方法包括如下步骤：S1：样品采集：采用DFJ‑1型五段冲击分级采样器采集室内的空气颗粒物，所采集的颗粒物各级空气动力学直径分别为＞7μm、3.3‑7μm、2‑3.3μm、1.1‑2μm和＜1.1μm，将滤纸进行预处理，然后后密封，用低温冰箱冷藏；S2：样品处理：将样品剪成等面积的碎片，置于锥形瓶中，用正己烷和乙醚进行超声波抽取1‑3次，每次抽取时间为15‑25分钟，合并提取液，过滤，然后浓缩，分离出多环芳烃；S3：滴注：取42只小鼠随机分为七组，先用麻醉剂麻醉，进行透视灯下气管滴注，然后编号1‑7，编号1不做任何处理，编号2每只滴注50‑60μL无菌PBS，编号3‑7分别滴注经过步骤S2处理的空气动力学直径分别为＞7μm、3.3‑7μm、2‑3.3μm、1.1‑2μm和＜1.1μm的多环芳烃浓缩液50‑60的μL，每周滴注2‑3次，连续滴注3‑4周；S4：检测：最后依次滴注24小时后处死小鼠，检测肺泡灌洗液中炎性因子IL‑1和IL‑6的水平，纵膈淋巴结中CD4+T细胞和CD8+T细胞比例变化，纵膈淋巴结中Th17和Treg细胞比例的变化；观察肝脏和脾脏脏器系数和肺脏病理改变并计算肺脏质量与体重比值，同时取右下肺组织投入10％福尔马林固定、石蜡包埋用于病理观察；将其余左肺用锡纸包裹，投入液氮中保存备用；大鼠左肺组织中结缔生长因子(CTGF)的表达：参照免疫组织化试剂盒说明书进行操作，CTGF体积稀释度1:200，利用图像采集系统操作，随机取每张照片中的5个视野进行积分光密度值的测定，取平均值作为标本值；CTGF的体积稀释度1:1000，甘油醛‑3‑磷酸脱氢酶(GAPDH)体积稀释度1:2000，最后用ChemiDocMP成像分析系统采集图像，用积分吸光度比值(CTGF/GAPDH)作为其相对表达量。