[发明专利]一种快速定量检测MYO的微流控荧光免疫芯片

摘要

本发明涉及快速定量检测MYO的微流控荧光免疫芯片，可有效解决现有MYO检测芯片灵敏度低、重复性差、易受外界环境干扰，以及现有配套仪器昂贵、检测时间长的问题，底板为空心凹槽长方形，顶板置于底板凹槽的正上方，构成底板和顶板的密封结构，顶板的上平面有样品加样口和负压接口，底板的凹槽内经回形管装有串接在一起的样品加样区、血细胞过滤区、微栅反应腔、时间阀、识别反应区和废液池，血细胞过滤区上装有血细胞滤膜，样品加样口正对底板样品凹槽内的样品加样区，回形管的负压端接负压接口，微栅反应腔预封装荧光标记的抗MYO单克隆抗体混合样品，识别反应区包被抗MYO的单克隆抗体；本发明结构简单，易生产制备，使用方便，准确率高，节能环保。

主权项

1.一种快速定量检测MYO的微流控荧光免疫芯片，包括底板、顶板、样品加样区、微栅反应腔、识别反应区、废液室和血细胞过滤区，其特征在于，所述的底板（1）为空心凹槽长方形，顶板（2）置于底板凹槽的正上方，构成底板和顶板的密封结构，顶板的上平面有样品加样口（11）和负压接口（9），底板的凹槽内经回形管（10）装有串接在一起的样品加样区（3）、血细胞过滤区（12）、微栅反应腔（5）、时间阀（6）、识别反应区（7）和废液池（8），血细胞过滤区（12）上装有血细胞滤膜（4），样品加样口（11）正对底板样品凹槽内的样品加样区（3），回形管（10）的负压端接负压接口（9），微栅反应腔（5）预封装荧光标记的抗MYO单克隆抗体混合样品，构成样品与荧光标记的BNP单克隆抗体混合反应区；识别反应区（7）包被抗MYO的单克隆抗体；样品加样区（3）中的样品靠自虹吸作用移动或采用负压接口连接控制泵进行移动；所述的MYO单克隆抗体的制备方法是：1）、荧光微球的活化、洗涤，此步骤需要将荧光微球表面修饰基团活化，取直径为200 nm荧光微球，加入缓冲液离心，弃上清，沉淀用洗涤缓冲液重复洗涤3次；将末次沉淀重悬于所述洗涤缓冲液中，使荧光微球的质量体积比终浓度为1%，所述洗涤缓冲液选自PBS缓冲液和MES缓冲液中的一种：2）、MYO抗体包被荧光微球，取1 ml活化洗涤后的200 nm胶乳溶液，加入抗MYO抗体，使抗MYO抗体终浓度为1 mg/ml ；混匀后，置4度，摇床以220rpm转速包被8h；用PBS缓冲液洗涤未与荧光微球结合的抗MYO抗体，重复3次；封闭：将洗涤后的抗MYO抗体的荧光微球溶于包含所述保护剂的缓冲液中，使所述荧光微球的质量体积比终浓度为0.1‑0.14%；3）、抗MYO抗体和荧光微球结合后封闭，将所述荧光微球与所述抗MYO抗体混合物，加入BSA0.3%，室温下反应2h，离心，除去其中少量的沉淀物；清洗，将形成的荧光微球‑抗MYO抗体复合物溶液离心，弃上清，加入磷酸盐缓冲液重复清洗3次；将末次沉淀溶于含所述保护剂和防腐剂的缓冲液中，使所述荧光微球的质量体积比终浓度为0.04%‑0.14%。