[发明专利]一种沉默小鼠肠道RASGRP1表达的腺相关病毒及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种沉默小鼠肠道RASGRP1表达的腺相关病毒及其制备方法和应用。本发明针对RASGRP1基因设计了三对siRNA序列，并构建了RasGRP1 shRNA干扰载体，qPCR筛靶结果显示，PAAVE2113,PAAVE2114和PAAVE2115均有沉默效果，其中PAAVE2115沉默效果最好，沉默效率约为74％，与WB结果一致。将所述的干扰载体和辅助质粒共转染工程细胞，获得沉默小鼠肠道RASGRP1表达的腺相关病毒，动物实验证实，采用该腺相关病毒干扰C57小鼠，可使小鼠小肠组织中RasGRP1蛋白表达下降，且采用腹腔注射的方式，干扰效果最好。

主权项

1.一种抑制RASGRP1基因表达的siRNA，其特征在于，所述的siRNA编码序列为：(1)正义链：5’‑CcggTCGACACGACCCAAATTAATTCTCGAGAATTAATTTGGGTCGTGTCGATTTTTT‑3’反义链：5’‑ctagaaaaaaTCGACACGACCCAAATTAATTCTCGAGAATTAATTTGGGTCGTGTCGA‑3’；或(2)正义链：5’‑CcggAGAACAAAGAGTCCCTTATAACTCGAGTTATAAGGGACTCTTTGTTCTTTTTTT‑3’反义链：5’‑ctagaaaaaaAGAACAAAGAGTCCCTTATAACTCGAGTTATAAGGGACTCTTTGTTCT‑3’；或(3)正义链：5’‑CcggGAACTGGAACAGGAAATAAATCTCGAGATTTATTTCCTGTTCCAGTTCTTTTTT‑3’反义链：5’‑ctagaaaaaaGAACTGGAACAGGAAATAAATCTCGAGATTTATTTCCTGTTCCAGTTC‑3’。