[发明专利]一种液体培养柴达木大肥菇生产菌丝体的方法

摘要

本发明公开了一种液体培养柴达木大肥菇生产菌丝体的方法，以柴达木大肥菇斜面菌种、青稞为原料配合去离子水以及作为分析纯的葡萄糖、琼脂粉、蛋白胨、硫酸镁和氯化钙，准备好培养基，然后按以下流程进行：种子斜面活化、一级液体种子制备、二级种子制备、发酵培养。本发明通过设计由种子斜面活化、一级液体种子制备、二级种子制备、发酵培养等步骤构成的由液体培养柴达木大肥菇生产菌丝体的方法，总共仅需一个月左右即可培养得到柴达木大肥菇生产菌丝体，不仅速度快，而且方法简单、容易操作，其菌丝体可以代替野生柴达木大肥菇子实体，从而可以对野生柴达木大肥菇资源起保护作用。

主权项

1.一种液体培养柴达木大肥菇生产菌丝体的方法，其特征在于：按以下步骤进行，1)原料准备：柴达木大肥菇斜面菌种、青稞、去离子水以及作为分析纯的葡萄糖、琼脂粉、蛋白胨、硫酸镁和氯化钙；2)培养基：固体斜面培养基即PDA培养基、一级液体种子培养基即改良PDA培养基、二级种子罐培养基及发酵罐培养基；3)种子斜面活化：从原种中取一块菌体到固体斜面培养基即PDA培养基，以22±1℃的温度避光培养12‑15天，待菌丝长满斜面2/3且密集，于4℃的冰箱中冷藏待用；4)一级液体种子制备：将活化好的斜面菌种置于室温下48h，按改良PDA配制液体培养基，灭菌、冷却后备用；用接种铲取若干块斜面菌种，接种到一级液体种子培养基即改良PDA培养基中，以23±1℃的温度静置培养48h，然后于120r/min的摇床避光振荡培养6‑10天，至长出密集菌丝球；以10％接种量转接至灭菌冷却后的三角瓶中，以23±1℃、120r/min连续避光振荡培养3‑4天，即为一级液体种子；5)二级种子制备：先将种子罐进行空罐灭菌，冷却后，按种子罐培养基配方配制液体培养基，调节pH至7.3后，进行高温蒸汽灭菌，冷却至23±1℃，将已制备好的一级液体种子以15％的接种量，采用火焰接种法接入种子罐，在线控制种子罐温度为23±1℃、搅拌转速为100rpm，培养2‑4天；6)发酵培养：先将发酵罐进行空罐灭菌，冷却后，按发酵罐培养基配方配制液体培养基，调节pH至7.3后，进行高温蒸汽灭菌，冷却至23±1℃，将已制备好的二级种子液以15％的接种量，采用压差法接入发酵罐，在线控制发酵罐温度为23±1℃、搅拌转速110rpm，培养5‑7天。