[发明专利]一种利用大肠杆菌生产胞外阿魏酸酯酶的方法在审
| 申请号： | 201811169261.0 | 申请日： | 2018-10-08 |
| 公开（公告）号： | CN109182297A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 徐振上;王婷;刘新利 | 申请（专利权）人： | 齐鲁工业大学 |
| 主分类号： | C12N9/18 | 分类号： | C12N9/18;C12N15/70;C12N15/66;C12P7/42 |
| 代理公司： | 济南竹森知识产权代理事务所(普通合伙) 37270 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 250353 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用大肠杆菌生产胞外阿魏酸酯酶的方法。该方法包括如下步骤：(1)制备含有阿魏酸酯酶基因的重组大肠杆菌，所述的阿魏酸酯酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；(2)将步骤(1)制得的重组大肠杆菌经IPTG或乳糖诱导发酵，经去除菌体，纯化，制得阿魏酸酯酶。本发明首次通过采用限制性内切酶Nde I酶切阿魏酸酯酶基因后，核糖体结合位点后的首个酶切位点变为Nde I酶切位点，从而获得的阿魏酸酯酶具有天然的N端序列；该特殊结构使得阿魏酸酯酶能够在大肠杆菌合成后分泌至胞外，从而极大简化了阿魏酸酯酶的纯化和利用，对后续阿魏酸的工业化生产具有显著的促进作用。 | ||
| 搜索关键词： | 阿魏酸酯酶 阿魏酸酯酶基因 大肠杆菌 重组大肠杆菌 酶切位点 核糖体结合位点 限制性内切酶 核苷酸序列 促进作用 乳糖诱导 阿魏酸 天然的 菌体 酶切 分泌 去除 制备 发酵 合成 生产 | ||
【主权项】：
1.一种利用大肠杆菌生产胞外阿魏酸酯酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备含有阿魏酸酯酶基因的重组大肠杆菌，所述的阿魏酸酯酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；(2)将步骤(1)制得的重组大肠杆菌经IPTG或乳糖诱导发酵，经去除菌体，纯化，制得阿魏酸酯酶。
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