[发明专利]一种纳米金比色法检测米糠中脂肪酶活性的方法

摘要

本发明提供一种纳米金比色法检测米糠中脂肪酶活性的方法。其利用了吐温60修饰纳米金，在米糠中的脂肪酶存在时，水解吐温60的羧酸酯键，从而削弱了吐温60的空间静电排斥力，从而拉近了纳米金之间的距离，使其聚集变蓝。它解决了目前传统的米糠中的脂肪酶活检测方法过程复杂、成本昂贵、检测速度慢、灵敏度低等问题。其发明步骤如下：使用吐温60修饰纳米金，构建了纳米金比色传感器，与不同活性的脂肪酶建立标准曲线，并应用于检测米糠中的脂肪酶活性。在650和520nm处的吸光度比值与米糠中的脂肪酶活性在0.02～1.8mg/mL范围内呈现良好的线性关系，检出限为2.56×10^‑4mg/mL(S/N＝3)。此过程无需样品预处理、特异性强、灵敏度高，可实时检测米糠生产过程中脂肪酶活性。

主权项

1.一种纳米金比色法检测米糠中脂肪酶活性的方法，其特征在于用吐温60‑纳米金比色传感器检测米糠中脂肪酶活性的方法通过以下步骤实现：步骤一：纳米金溶液的制备：将300μL HAuCl4(0.1mol/L)溶液加入含有100mL超纯水的三口烧瓶中，剧烈搅拌且加热至沸腾，2min后加入4mL一定浓度现配的柠檬酸钠溶液，继续反应一定时间后停止加热，溶液颜色由黄色逐渐变为透明酒红色自然冷却到室温，制得的纳米金溶液在4℃保存备用；步骤二：吐温60‑纳米金比色传感器的合成：移取适量一定浓度的纳米金溶液和一定浓度的吐温60溶液按照一定的摩尔比进行混合，在室温下，轻微振荡2h，使吐温60在溶液中分散均匀，再静置10h，即得吐温60修饰的纳米金复合物；步骤三：纳米金比色传感器测定条件的优化：在0.2mol/LpH 7.5的PBS缓冲液，将标准活性的诺维信435脂肪酶加入到制备的吐温60‑纳米金复合溶液中，在一定温度条件下，反应一段时间，根据A650/A520比值实时检测脂肪酶活性大小，得到检测的最优条件；步骤四：建立不同活性脂肪酶的标准曲线：在得到检测的最优条件下，将不同活性的脂肪酶溶液加入到制备的吐温60‑纳米金复合溶液中，在一定的反应条件下反应后，以吸光度比值A650/A520作为纵坐标，时间为横坐标，绘制脂肪酶活的标准曲线；步骤五：米糠样品的实时检测：将100g新鲜米糠，经过碾米机碾磨30min后，得到分散均匀的米糠粉末，将得到的米糠粉末放置在空气中自然干燥，将放置在空气中的米糠粉末，每次间隔一定时间，称取适量的米糠样品，加入到含有吐温60修饰的纳米金复合物中反应一定时间，根据A650/A520比值实时检测米糠中脂肪酶活性，得到检测的最优条件。