[发明专利]一种外泌体分离制备方法在审
| 申请号： | 201811155640.4 | 申请日： | 2018-09-29 |
| 公开（公告）号： | CN109266613A | 公开（公告）日： | 2019-01-25 |
| 发明（设计）人： | 郝牧;宫达森;魏晓晶;邱录贵 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院血液病医院（血液学研究所） |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 天津欣达睿诚知识产权代理事务所(普通合伙) 12216 | 代理人： | 李欣 |
| 地址： | 300020 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种外泌体分离制备方法，属于生物技术领域。一种外泌体分离制备方法，包括如下步骤：1)离心去除细胞杂质；2)离心去除细胞碎片和大的蛋白杂质；3)将上清转移到新离心管中，离心弃沉淀，留上清；4)过滤上清并转移；5)将试剂XBP与样品混合后转移到膜吸附柱中，离心，弃管底的液体；6)离心去除残留在膜上的液体；7)加入试剂XWP，离心，弃管底的液体，将柱子换到新的离心管中；8)将试剂XE加到柱子上，离心将外泌体洗脱，得到含有外泌体的液体。本发明提取的外泌体的RNA纯度提高，杂质少，可以减低起始提取外泌体的生物样本体积同时提高循环外泌体的得率。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 离心去除细胞 离心管 柱子 生物技术领域 蛋白杂质 离心去除 生物样本 样品混合 膜吸附 得率 洗脱 沉淀 过滤 残留 | ||
【主权项】：
1.一种外泌体分离制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)离心去除生物样品中的细胞杂质；2)离心去除细胞碎片和大的蛋白杂质；3)将上清转移到新的1.5ml离心管中，4℃，12000g离心45min，弃沉淀，留上清；4)用0.2μm滤器过滤上清并转移到新的1.5ml离心管中；5)将试剂XBP与样品按照体积比1∶1的比例混合后转移到膜吸附柱exoEasy Midi Spin Columns中，500g离心1min，弃管底的液体；6)在3500g的条件下离心1min去除残留在exoEasy Midi Spin Columns膜上的液体；7)再向柱子exoEasy Midi Spin Columns中加入3.5ml试剂XWP，3500g条件下离心5min，弃管底的液体，将柱子换到新的离心管中；8)将400μl的试剂XE(QIAGEN No.160011905)加到exoEasy Midi Spin Columns上在3500g，5min的离心条件下将外泌体洗脱，得到含有外泌体的液体。
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